[細胞株におけるインターフェロン刺激遺伝子15のHIV-1感染上昇発現]

HIV-1感染がインターフェロン刺激遺伝子15（ISG15）の発現に影響するかどうかを調査し、in vitroでのISG15の抗ウイルス効果を決定するために、転写およびタンパク質レベルでのISG15発現、およびHIV-1のHIV-1に感染したさまざまなHIV-1で検出されました。または、それぞれトランスフェクトされた細胞株。HIV-1分子クローンPNL4-3を使用して293T、TZM-BL、およびHELA細胞をトランスフェクトし、HIV-1擬似型ウイルスを使用して、Jurkat、MT-1、およびTHP-1細胞に感染しました。感染またはトランスフェクションの24時間後に、総RNAの抽出のために細胞を回収し、その後、ISG15転写発現の定量化のためにリアルタイムPCRで使用しました。感染またはトランスフェクションの48時間後、ISG15タンパク質発現を検出するために総タンパク質の抽出のために細胞を採取しました。転写レベルでのISG15の有意なアップレギュレーションが、THP-1およびTZM-BL細胞の粒子であるHIV-1感染またはトランスフェクトされた細胞株で観察されました。ISG15タンパク質のアップレギュレーションは、TZM-BL細胞でのみ観察されました。ISG15とHIV-1の共輸送は、ISG15が293T細胞ではなく293T細胞ではHIV-1子孫ウイルスの産生を阻害したことを示しています。これらの結果は、HIV-1感染によるISG15に対する転写レベルと潜在的な拮抗メカニズムにおけるISG15の発現を同時に上方制御することを明らかにしました。

To investigate whether HIV-1 infection affects expression of interferon-stimulated gene 15 (ISG15) and determine the antiviral effect of ISG15 in vitro, ISG15 expression at transcription and protein level and supernatant p24 of HIV-1 was detected in various HIV-1 infected or transfected cell lines, respec tively. HIV-1 molecular clone pNL4-3 was used to transfect 293T, TZM-bl and HeLa cells while HIV-1 pseudo-typed virus was used to infect Jurkat, MT-1 and THP-1 cells. After twenty-four hours post infection or transfection, cells were harvested for extraction of total RNAs and subsequently used in real time PCR for quantification of ISG15 transcriptional expression. After forty-eight hours post infection or transfection, cells were harvested for extraction of total proteins to detect ISG15 protein expression. A significant up-regulation of ISG15 at transcription level was observed in HIV-1 infected or transfected cell lines, particulaly in THP-1 and TZM-bl cells. Up-regulation of ISG15 protein was observed only in TZM-bl cell. Cotransfection of ISG15 and HIV-1 indicated that ISG15 inhibited production of HIV-1 progeny virus in a dose and time depend manner in 293T cell but not TZM-bl cell. These results revealed upregulating ISG15 expression in transcriptional level and potential antagonistic mechanism against ISG15 by HIV-1 infection, simultanelusly.