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Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)20140101Vol.1116issue()

SLICまたはシーケンスによるプラスミド構造およびライゲーション非依存性クローニング

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, Non-U.S. Gov't
概要
Abstract

シーケンスとライゲーションに依存しないクローニング(NATメソッド4:251-256、2007)は、単純で効率的な方法で多噴射複合プラスミドを構築するための強力なツールです。6〜7のDNAフラグメントで構成されるプラスミドは、1日で組み立てられ、スクリーニングと抽出のためにさらに2日間組み立てられます。SLICには、5 'および3'末端で30〜40 bpの重複領域、T4 DNAポリメラーゼ、および構造用のオプションのRECAタンパク質を持つPCR産物が必要です。

シーケンスとライゲーションに依存しないクローニング(NATメソッド4:251-256、2007)は、単純で効率的な方法で多噴射複合プラスミドを構築するための強力なツールです。6〜7のDNAフラグメントで構成されるプラスミドは、1日で組み立てられ、スクリーニングと抽出のためにさらに2日間組み立てられます。SLICには、5 'および3'末端で30〜40 bpの重複領域、T4 DNAポリメラーゼ、および構造用のオプションのRECAタンパク質を持つPCR産物が必要です。

Sequence and ligation-independent cloning (Nat Methods 4:251-256, 2007) is a powerful tool for the construction of multi-fragment complex plasmids in a simple and efficient manner. Plasmids consisting of 6-7 DNA fragments can be assembled in a single day, with additional 2 days for screening and extraction. SLIC requires PCR products with overlapping regions of 30-40 bp at the 5' and 3' ends, T4 DNA polymerase, and an optional RecA protein for construction.

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