ELP-SUMOタグを使用して、大腸菌における可溶性ヒト4月の発現と精製

4月は、細胞の文脈に応じて、生存だけでなく生存を媒介するリガンドの腫瘍壊死因子（TNF）ファミリーのメンバーです。このレポートでは、エラスチン様ポリペプチドとSUMO（ELP-SUMO）タグを使用して、大腸菌で可溶性ヒト4月を得るための新しい方法を提示します。ELP-SUMOタグを使用した融合タンパク質は、15°Cの可溶性形態で発現しました。逆遷移サイクリング（ITC）メソッドに基づいた精製後、精製されたELP-SUMO-HAPRIL FUSIONタンパク質をその後、SUMOプロテアーゼによって切断して成熟したhaprilを放出しました。アフィニティクロマトグラフィーに続いて、標的タンパク質は高純度で再培養されました。最後に、約4.8mgの組換えhaprilが85％以上の純度で1Lの細菌培養から得られました。組換えhaprilの分子量（MR）は、MRDI-TOF MSによってMR 16,314として確認されました。精製されたハプリルは、ジュラカット細胞で生物活性を示します。これは、ELP-Sumoタグを使用した大腸菌のHaprilの可溶性生産に関する最初のレポートです。

APRIL is a member of the tumor necrosis factor (TNF) family of ligands that mediate tumor cells proliferation as well as survival, depending on the cellular context. In this report, we present a novel method to obtain soluble human APRIL in Escherichia coli using the elastin-like polypeptide and SUMO (ELP-SUMO) tags. The fusion protein with ELP-SUMO tag was expressed in a soluble form at 15°C. After purification based on inverse transition cycling (ITC) method, the purified ELP-SUMO-hAPRIL fusion protein was subsequently cleaved by SUMO protease to release mature hAPRIL. Following affinity chromatography, the target protein was re-purified with high purity. Finally, about 4.8mg recombinant hAPRIL was obtained from 1l bacterial culture with no less than 85% purity. The molecular mass (Mr) of the recombinant hAPRIL was confirmed by MALDI-TOF MS as Mr 16,314. The purified hAPRIL exhibits biological activity on Jurkat cells. It is the first report on soluble production of hAPRIL in E. coli using ELP-SUMO tag.