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小分子ルシファー・イエローの液相エンドサイトーシスが酵母サッカロミセス・セレビシエ、マカロウで発生するというRiezman's Report（Riezman、H。1985、Cell。40：1001-1009）と同時に同時に（Cell。40：1001-1009）。ここで合成および精製されたFDのサンプルは、市販のFDを使用した標識を許可する条件下で酵母液胞の標識に失敗しました。クロマトグラフィーは、市販のFDが少なくとも3つの低分子量蛍光化合物で重く汚染されていることを明らかにしました。透析は汚染物質を除去するのに効果がありませんでした。精製（Sephadex G25、エタノール抽出）後、市販のFDは液胞を標識することができませんでした。部分的に精製されたFDで標識された細胞の抽出物には、セファデックスと薄層クロマトグラフィーに基づいて、FDではなくFITCが含まれていました。標識されていない70 kDデキストランの存在または不在のいずれかで、本物のFITC（10マイクログラム/mL）は、液胞の効果的な標識剤でした。急速な速度論（pH 5.5で10（6）あたり0.28 pmol/min細胞）とFITC取り込みのpH依存性は、FITC取り込みのメカニズムがエンドサイトーシスではなく拡散を伴うことを示唆しています。これらの結果を考慮して、未編成された商用FDを使用する実験のラベル付けは、注意して解釈する必要があります。
小分子ルシファー・イエローの液相エンドサイトーシスが酵母サッカロミセス・セレビシエ、マカロウで発生するというRiezman's Report（Riezman、H。1985、Cell。40：1001-1009）と同時に同時に（Cell。40：1001-1009）。ここで合成および精製されたFDのサンプルは、市販のFDを使用した標識を許可する条件下で酵母液胞の標識に失敗しました。クロマトグラフィーは、市販のFDが少なくとも3つの低分子量蛍光化合物で重く汚染されていることを明らかにしました。透析は汚染物質を除去するのに効果がありませんでした。精製（Sephadex G25、エタノール抽出）後、市販のFDは液胞を標識することができませんでした。部分的に精製されたFDで標識された細胞の抽出物には、セファデックスと薄層クロマトグラフィーに基づいて、FDではなくFITCが含まれていました。標識されていない70 kDデキストランの存在または不在のいずれかで、本物のFITC（10マイクログラム/mL）は、液胞の効果的な標識剤でした。急速な速度論（pH 5.5で10（6）あたり0.28 pmol/min細胞）とFITC取り込みのpH依存性は、FITC取り込みのメカニズムがエンドサイトーシスではなく拡散を伴うことを示唆しています。これらの結果を考慮して、未編成された商用FDを使用する実験のラベル付けは、注意して解釈する必要があります。
Concurrent with Riezman's report (Riezman, H. 1985, Cell. 40:1001-1009) that fluid-phase endocytosis of the small molecule Lucifer yellow occurs in the yeast Saccharomyces cerevisiae, Makarow (Makarow, M. 1985. EMBO [Eur. Mol. Biol. Organ.] J. 4:1861-1866) reported the endocytotic uptake of 70-kD FITC-dextran (FD) and its subsequent compartmentation into the yeast vacuole. Samples of FD synthesized and purified here failed to label yeast vacuoles under conditions that allowed labeling using commercial FD. Chromatography revealed that the commercial FD was heavily contaminated with at least three low molecular weight fluorescent compounds. Dialysis was ineffective for removing the contaminants. After purification (Sephadex G25, ethanol extraction), commercial FD was incapable of labeling vacuoles. Extracts of cells labeled with partially purified FD contained FITC, not FD, based on Sephadex and thin layer chromatography. In either the presence or absence of unlabeled 70-kD dextran, authentic FITC (10 micrograms/ml) was an effective labeling agent for vacuoles. The rapid kinetics (0.28 pmol/min per 10(6) cells at pH 5.5) and the pH dependence of FITC uptake suggest that the mechanism of FITC uptake involves diffusion rather than endocytosis. In view of these results, labeling experiments that use unpurified commercial FD should be interpreted with caution.
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