定義されたゼノフリー環境でのラミニン-521/E-カドヘリンマトリックス上のヒト胚性幹細胞のクローン培養

多能性ヒト胚性幹（HES）細胞の確立と拡大のための堅牢な方法の欠如は、依然として細胞療法の発達を妨げています。ラミニン（LN）は、細胞の接着、分化、移動、表現型の安定性に重要な細胞型特異的基底膜タンパク質のファミリーです。ここでは、ヒト組換えLN-521アイソフォームを生成および分離し、LN-521とE-カドヘリンを含む細胞培養マトリックスを開発します。このマトリックスは、岩石阻害剤のない完全に化学的に定義されたXenoを含まない状態で、HES細胞のクローン導出、クローン生存、および長期の自己再生を可能にします。LN-521もE-カドヘリンだけも、HES細胞のクローン生存を可能にしません。LN-521/e-カドヘリンマトリックスは、胚を破壊する必要なく、胚盤胞内細胞質量および単一胚盤胞細胞からHES細胞株の導出を可能にします。この方法は、再生医療目的でさまざまな細胞タイプの開発のためにHES細胞株の生成を促進することができます。

Lack of robust methods for establishment and expansion of pluripotent human embryonic stem (hES) cells still hampers development of cell therapy. Laminins (LN) are a family of highly cell-type specific basement membrane proteins important for cell adhesion, differentiation, migration and phenotype stability. Here we produce and isolate a human recombinant LN-521 isoform and develop a cell culture matrix containing LN-521 and E-cadherin, which both localize to stem cell niches in vivo. This matrix allows clonal derivation, clonal survival and long-term self-renewal of hES cells under completely chemically defined and xeno-free conditions without ROCK inhibitors. Neither LN-521 nor E-cadherin alone enable clonal survival of hES cells. The LN-521/E-cadherin matrix allows hES cell line derivation from blastocyst inner cell mass and single blastomere cells without a need to destroy the embryo. This method can facilitate the generation of hES cell lines for development of different cell types for regenerative medicine purposes.