末梢動脈疾患患者の循環抗β2-グリコタンパク質I抗体は、内皮細胞におけるToll様受容体4のゲノム過剰発現を引き起こします

目的：循環抗β2-グリコタンパク質I（ABGPI）抗体は末梢動脈疾患（PAD）に関連しており、内皮細胞による白血球接着分子と炎症誘発性サイトカインの発現を誘導します。私たちの目的は、これらの細胞がPAD患者から得られた血清陽性ABGPIヒト血清に曝露した後、内皮細胞の有料様受容体2（TLR2）およびToll様受容体4（TLR4）によってトリガーされる細胞シグナル伝達カスケードを介して、自然免疫系の転写活性化経路を研究することです。 方法：PAD患者から血清サンプルを取得し、PADのないコントロールを取得しました。ABGPI血清力価は、間接免疫蛍光を使用して検出されました。私たちのサンプルは、グループI（PADおよびABGPI力価≥1：100; n = 15）、グループII（PADおよびABGPI力価<1：100; n = 15）、およびコントロール参加者（パッドなし、n = 15）の3つのグループに層化されました。すべての血清サンプルを、ヒト大動脈内皮細胞（HAEC）培養でインキュベートしました。TLR2およびTLR4受容体のゲノム発現とその共有細胞内シグナル伝達分子、ミエロイド分化一次応答遺伝子88（MyD88）、およびインターロイキン（IL）-1受容体関連キナーゼ（1IRAK1）は、各血清へのHAECにさらされた後に測定されました。 結果：TLR4のHAECゲノム発現は、グループI II血清への暴露後よりもグループI血清への曝露後に高かった（Log10×10相関定量[RQ]：1.80±0.42対1.37±0.39; P = .01）または対照血清（Log10×10-RQ：1.80±0.42 VS 1.09±0.26;TLR4の発現は、コントロールグループよりもグループIIの方が高かった（log10×10-rq：1.37±0.39 vs 1.09±0.26; p = .04）。TLR4発現は、MyD88（r = 0.54; p <.01）およびIRAK1（r = 0.55; p <.01）の発現と相関していました。MyD88とIRAK1ゲノム発現の間に正の相関を記録しました（r = 0.58; p <.01）。 結論：我々の結果は、ABGPI抗体の上昇を有するPAD患者からの血清が、内皮細胞におけるTLR4およびその細胞シグナル伝達分子のゲノム過剰発現を誘導することを示唆しています。

OBJECTIVE: Circulating anti-β2-glycoprotein I (ABGPI) antibodies are associated with peripheral arterial disease (PAD) and induce the expression of leukocyte adhesion molecules and proinflammatory cytokines by endothelial cells. Our aim is to study a transcriptional activation pathway of the innate immune system through the cellular signalling cascade triggered by receptors Toll-like receptor 2 (TLR2) and Toll-like receptor 4 (TLR4) of endothelial cells after the exposure of these cells to seropositive ABGPI human serum obtained from PAD patients. METHODS: We obtained serum samples from PAD patients and controls without PAD. ABGPI serum titer was detected using indirect immunofluorescence. Our sample was stratified into three groups: group I (PAD and ABGPI titer ≥1:100; n = 15), group II (PAD and ABGPI titer <1:100; n = 15), and control participants (no PAD; n = 15). All serum samples were incubated with human aortic endothelial cell (HAEC) culture. Genomic expression of TLR2 and TLR4 receptors and their shared intracellular signalling molecules, myeloid differentiation primary response gene 88 (MyD88), and interleukin (IL)-1 receptor-associated kinase (1IRAK1), were measured after the exposure of HAECs to each serum. RESULTS: HAEC genomic expression of TLR4 was higher after the exposure to group I serum than after the exposure to group II serum (log10×10-relative quantification [RQ]: 1.80 ± 0.42 vs 1.37 ± 0.39; P = .01) or control serum (log10×10-RQ: 1.80 ± 0.42 vs 1.09 ± 0.26; P < .01). TLR4 expression was higher in group II than in the control group (log10×10-RQ: 1.37 ± 0.39 vs 1.09 ± 0.26; P = .04). TLR4 expression correlated with MyD88 (r = 0.54; P < .01) and IRAK1 (r = 0.55; P < .01) expression. We recorded a positive correlation between MyD88 and IRAK1 genomic expression (r = 0.58; P < .01). CONCLUSIONS: Our results suggest that serum from PAD patients with elevated ABGPI antibodies induces a genomic overexpression of TLR4 and its cellular signalling molecules in endothelial cells.