LC蛍光およびLC-MS検出によるグリコサミノグリカン由来、前柱、2-アミノアクリドン標識二糖の分析

グリコサミノグリカン（GAG）は、平均分子量、分子量範囲、二糖の組成、およびスルホ基の内容と位置にかなりの不均一性を持っています。GAGの分析における最近の技術的進歩にもかかわらず、GAG二糖組成の決定は依然として困難なままであり、GAG機能を理解するために必要な重要な情報を提供します。GAG由来の二糖類の分析は、酵素治療に依存しており、組成マッピングのための最も実用的かつ定量的なアプローチの1つを提供します。芳香族の蛍光標識を使用して二糖の削減端をタグ付けすると、検出と解像度が改善できる特性を備えた安定した誘導体が得られます。オンラインエレクトロスプレーイオン化質量分析（ESI-MS）を備えたHPLCは、硫酸化オリゴ糖の検出と特性評価のための比較的ソフトイオン化方法を提供します。組織、生物液、または細胞から得られたGAGは、さまざまな酵素で処理されて、2-アミノアクリドン（AMAC）で蛍光標識された二糖類を得て、蛍光による高感度検出のために異なるLCシステムによって分解され、MSによって誤って特徴付けられていることはありません。。GAG由来の二糖類の調製と標識は、約1〜2日で実行でき、その後のHPLC分離およびオンライン蛍光検出およびESI-MS分析にはさらに1〜2時間かかります。

Glycosaminoglycans (GAGs) possess considerable heterogeneity in average molecular mass, molecular mass range, disaccharide composition and content and position of sulfo groups. Despite recent technological advances in the analysis of GAGs, the determination of GAG disaccharide composition still remains challenging and provides key information required for understanding GAG function. Analysis of GAG-derived disaccharides relies on enzymatic treatment, providing one of the most practical and quantitative approaches for compositional mapping. Tagging the reducing end of disaccharides with an aromatic fluorescent label affords stable derivatives with properties that enable improved detection and resolution. HPLC with on-line electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) offers a relatively soft ionization method for detection and characterization of sulfated oligosaccharides. GAGs obtained from tissues, biological fluids or cells are treated with various enzymes to obtain disaccharides that are fluorescently labeled with 2-aminoacridone (AMAC) and resolved by different LC systems for high-sensitivity detection by fluorescence, and then they are unambiguously characterized by MS. The preparation and labeling of GAG-derived disaccharides can be performed in ∼1-2 d, and subsequent HPLC separation and on-line fluorescence detection and ESI-MS analysis takes another 1-2 h.