ヒト好中球におけるサイトカイン遺伝子発現の高速かつ正確な定量分析

伝統的に短命のエフェクター細胞と見なされている多核好中球は、現在、自然および適応免疫システムのエフェクターおよび調節回路の重要な成分と見なされています。宿主免疫応答の重要なプレーヤーとしての好中球の生理学的機能のほとんどは、急性炎症の初期段階で作用するだけでなく、炎症反応の進行とその​​後の特定の免疫応答の開始を条件に依存することもできます。多くの炎症性および免疫調節性サイトカインを生産および放出する能力。この事実は、炎症性、感染性、自己免疫、および腫瘍性疾患の病因における好中球の重要性、役割、および生理学的および病理学的意義を再評価し、好中球を選択的な薬理学的介入の重要な潜在的標的と特定しました。これに関連して、好中球由来のサイトカインとケモカインの調節のメカニズムを理解することは、好中球がin vivoの病態生理学的プロセスにどのように影響するかをよりよく理解するための重要なステップを表しています。ここでは、in vitro活性化されたヒト好中球におけるサイトカイン発現のパターンを迅速かつ正確に特徴付けるために開発した方法の更新されたバージョンを説明し、議論します。ヒト好中球におけるサイトカイン遺伝子発現の正確で敏感で、信頼性があり、真正な分析に適した戦略としての逆転写定量的リアルタイムPCRアッセイの検証は、好中球に厳密に特異的ないくつかの問題を克服し、重要なツールを提供します。遺伝子発現分析のための多くの実験条件をテストするための好中球研究領域。

Polymorphonuclear neutrophils, traditionally viewed as short-lived effector cells, are nowadays regarded as important components of effector and regulatory circuits in the innate and adaptive immune systems. Most of the physiological functions of neutrophils as crucial players in the host immune response, able not only to act in the early phases of acute inflammation but also to condition the progression of the inflammatory reaction and the subsequent initiation of the specific immune response, rely on their capacity to produce and release a number of proinflammatory and immunoregulatory cytokines. This fact has reevaluated the importance, role, and physiological and pathological significance of neutrophils in the pathogenesis of inflammatory, infectious, autoimmune, and neoplastic diseases and has identified neutrophils as an important potential target for selective pharmacological intervention to both promote and restrain inflammation. In this context, understanding the mechanisms of modulation of neutrophil-derived cytokines and chemokines represents a critical step toward a better understanding of how neutrophils may influence pathophysiological processes in vivo. Herein, we describe and discuss an updated version of the methods that we have developed to rapidly and precisely characterize the pattern of cytokine expression in in vitro-activated human neutrophils. The validation of the reverse transcription quantitative real-time PCR assay as a suitable strategy for an accurate, sensitive, reliable, and bona fide analysis of cytokine gene expression in human neutrophils overcomes several problems strictly specific to neutrophils and offers an important tool, in the neutrophil research area, to test many experimental conditions for gene expression analysis.