CHO細胞の支配的な選択可能なマーカーとしてのphleomycin耐性

Tn5およびStreptoalloteichus hindustanus（sh）ble遺伝子は、ブレオマイシン - フェロマイシン抗生物質に対する耐性を付与しており、RSV-LTRプロモーターの下で哺乳類のベクターにクローン化されています。得られたプラスミドであるPut506とPut507は、それぞれリン酸カルシウムまたは最近記載されたポリブレン-DMSO法のいずれかによってCHO細胞をトランスフェクトするために使用しました。put507を使用したトランスフェクション後に、フロマイシンまたはブレオマイシン耐性クローンはより高い頻度で発生し、PUT507トランスフェクト剤はPut506トランスフェクト剤よりも両方の抗生物質に対してより耐性がありました。Put507トランスフェクタントのフロマイシン耐性は安定しており、ゲノムDNAにおけるプラスミド配列の統合と関連していました。支配的なphleomycin耐性表現型を付与するSH BLE遺伝子は、CHO細胞と他の動物細胞株で有用な移動可能な選択可能なマーカーを提供するはずです。

The Tn5 and the Streptoalloteichus hindustanus (Sh) ble genes conferring resistance to bleomycin-phleomycin antibiotics have been cloned into a mammalian vector under the RSV-LTR promoter. The resulting plasmids, pUT506 and pUT507 respectively, were used to transfect CHO cells by either the calcium phosphate or the recently described polybrene-DMSO method. Phleomycin- or bleomycin-resistant clones arose with a higher frequency after transfection with pUT507, and pUT507 transfectants were more resistant to both antibiotics than pUT506 transfectants. Phleomycin resistance in pUT507 transfectants was stable and associated with integration of plasmid sequences in genomic DNA. The Sh ble gene, which confers a dominant phleomycin-resistance phenotype, should provide a useful transferable selectable marker in CHO cells as well as in other animal cell lines.