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立体除外クロマトグラフィー（SXC）は、タンパク質クロマトグラフィーの新しいモードであり、移動相におけるポリエチレングリコール（PEG）の立体除外により、大型タンパク質が親水性の固定相表面に保持され、その後保持されたタンパク質を保持することができます。PEG濃度の減少。この研究では、SXCはポリアクリルアミドクリオゲルモノリスで評価されました。SXCのゲル表面でのγ-グロブリン沈殿の顕微鏡観察が初めて報告されました。固定相表面上のタンパク質沈殿物のコンパクトな梱包により、γ-グロブリンのクリオゲルモノリスの動的保持能力は、吸着ベースのクロマトグラフィーのクリオゲルベッドのものよりもはるかに高い20 mg/mLベッド容積に達しました。タンパク質保持能力に対する分子量とPEG、溶液pHおよび塩濃度の濃度の効果は、SXCの以前の研究と一致していました。相互接続されたマクロポア（10〜100μm）を備えたクリオゲルモノリスは、粘性PEGバッファーのはるかに簡単なフロースルーを可能にするため、SXCは低腰圧で動作できます。したがって、クリオゲルモノリスは、以前に報告された狭い毛穴の他のモノリスよりもSXCに適しています。ウシ血清タンパク質の分離では、アルブミンが高い純度でブレークスルー画分で回収され、グロブリンは溶出プールに8倍以上濃縮されました。したがって、この研究は、クリオゲルモノリスカラムでのSXCによる迅速な血清タンパク質分離と濃度を示しています。
立体除外クロマトグラフィー（SXC）は、タンパク質クロマトグラフィーの新しいモードであり、移動相におけるポリエチレングリコール（PEG）の立体除外により、大型タンパク質が親水性の固定相表面に保持され、その後保持されたタンパク質を保持することができます。PEG濃度の減少。この研究では、SXCはポリアクリルアミドクリオゲルモノリスで評価されました。SXCのゲル表面でのγ-グロブリン沈殿の顕微鏡観察が初めて報告されました。固定相表面上のタンパク質沈殿物のコンパクトな梱包により、γ-グロブリンのクリオゲルモノリスの動的保持能力は、吸着ベースのクロマトグラフィーのクリオゲルベッドのものよりもはるかに高い20 mg/mLベッド容積に達しました。タンパク質保持能力に対する分子量とPEG、溶液pHおよび塩濃度の濃度の効果は、SXCの以前の研究と一致していました。相互接続されたマクロポア（10〜100μm）を備えたクリオゲルモノリスは、粘性PEGバッファーのはるかに簡単なフロースルーを可能にするため、SXCは低腰圧で動作できます。したがって、クリオゲルモノリスは、以前に報告された狭い毛穴の他のモノリスよりもSXCに適しています。ウシ血清タンパク質の分離では、アルブミンが高い純度でブレークスルー画分で回収され、グロブリンは溶出プールに8倍以上濃縮されました。したがって、この研究は、クリオゲルモノリスカラムでのSXCによる迅速な血清タンパク質分離と濃度を示しています。
Steric exclusion chromatography (SXC) is a new mode of protein chromatography, in which large proteins are retained on hydrophilic stationary phase surface due to the steric exclusion of polyethylene glycol (PEG) in the mobile phase, and thereafter the retained proteins can be eluted by reducing PEG concentration. In this work, SXC was evaluated on a polyacrylamide cryogel monolith. Microscopic observation of γ-globulin precipitates on the gel surface in SXC was reported for the first time. Due to the compact packing of protein precipitates on the stationary phase surface, the dynamic retention capacity of the cryogel monolith for γ-globulin reached 20 mg/mL bed volume, much higher than those of cryogel beds in adsorption-based chromatography. The effect of molecular weight and concentration of PEG, solution pH and salt concentration on protein retention capacity was in agreement with the earlier work on SXC. Because the cryogel monoliths with interconnected macropores (10-100 μm) allow much easy flow-through of viscous PEG buffer, the SXC can be operated at low back pressure. Hence, the cryogel monoliths are more suitable for SXC than other monoliths of narrow pores reported previously. In the separation of bovine serum proteins, albumin was recovered in the breakthrough fraction with high purity, and globulin was over eight times concentrated in the elution pool. This work has, thus, demonstrated the rapid serum protein separation and concentration by SXC on the cryogel monolith columns.
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