サイトカインシグナル伝達1の抑制因子の過剰発現は、C172神経幹細胞の神経分化を促進します

目的：C17.2神経幹細胞（NSC）の調節と分化におけるサイトカインシグナル伝達1（SOCS1）の抑制因子の役割とメカニズムを調査する。 方法：この研究では、Lentiviral（LV）-SOCS1強化緑色蛍光タンパク質（EGFP）を構築し、C17.2 NSCにトランスフェクトしました。C17.2 NSCには、LV-SOCS1-EGFP、LV-EGFP、およびリン酸緩衝生理食塩水（PBS）の3つのグループがありました。C17.2 NSCにおける微小管関連タンパク質2（MAP2）、グリア線維性酸性タンパク質（GFAP）、ミエリン塩基性タンパク質（MBP）、ネスチン、およびβ-チューブリンIIIの発現レベルは、逆転写ポリメラーゼ鎖反応により分析されました（RT-PCR）、免疫細胞化学、およびウエスタンブロット。さらに、C17.2 NSCのJAKS/STATSファミリーメンバーのリン酸化レベルをウエスタンブロットで分析しました。さらに、トランスフェクション後のC17.2 NSCの形態学的変化は、光学顕微鏡で観察されました。 結果：MAP2の遺伝子発現は有意に増加し、ネスチンの遺伝子発現はLV-SOCS1-EGFPをトランスフェクトしたC17.2 NSCで有意に減少しました。一部のC17.2 NSCは、LV-SOCS1-EGFPトランスフェクション後に顕著な神経形態学的変化を受け、β-チューブリンIIIを発現しました。LV-SOCS1-EGFPトランスフェクション後のC17.2 NSCにおけるβ-チューブリンIII免疫細胞化学染色およびβ-チューブリンIIIタンパク質発現の陽性細胞の数は、LV-EGFPトランスフェクションまたはPBS治療後のものよりも多かった。C17.2 NSCのJAK2およびSTAT3のリン酸化レベルは、SOCS1の過剰発現によって阻害されました。 結論：C17.2 NSCにおけるSOCS1の過剰発現は、JAK2およびSTAT3の負のフィードバック阻害によって媒介される可能性が高いニューロンの生成を促進します。この研究は、SOCS1が神経新生の調節に関与しているという証拠を提供する最初の研究です。

OBJECTIVE: To investigate the role and mechanism of suppressor of cytokine signaling 1 (SOCS1) in the regulation and differentiation of C17.2 neural stem cells (NSCs). METHODS: In this study, lentiviral (LV)-SOCS1-enhanced green fluorescent protein (EGFP) was constructed and transfected into C17.2 NSCs. There were three groups of C17.2 NSCs: LV-SOCS1-EGFP, LV-EGFP, and phosphate-buffered saline (PBS). The expression levels of microtubule-associated protein 2 (MAP2), glial fibrillary acidic protein (GFAP), myelin basic protein (MBP), nestin, and β-tubulin III in C17.2 NSCs were analyzed by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), immunocytochemistry, and western blot. In addition, the phosphorylation level of Jaks/Stats family members in C17.2 NSCs were analyzed by western blot. Moreover, the morphological changes of C17.2 NSCs after transfection were observed by light microscopy. RESULTS: The gene expression of MAP2 increased significantly and the gene expression of nestin decreased significantly in C17.2 NSCs transfected with LV-SOCS1-EGFP. Some C17.2 NSCs underwent prominent neuronal morphological changes and expressed β-tubulin III after LV-SOCS1-EGFP transfection. The number of positive cells for β-tubulin III immunocytochemical staining and β-tubulin III protein expression in C17.2 NSCs after LV-SOCS1-EGFP transfection were both more than those after LV-EGFP transfection or PBS treatment. The phosphorylation levels of Jak2 and Stat3 but not Jak3 in C17.2 NSCs were inhibited by SOCS1 overexpression. CONCLUSION: Overexpression of SOCS1 in C17.2 NSCs promotes the generation of neurons, which is likely mediated by the negative feedback inhibition of Jak2 and Stat3. This study is the first to provide evidence that SOCS1 is involved in the regulation of neurogenesis.