骨髄、脂肪組織、臍帯からの馬間葉系幹細胞：免疫表現型の特性評価と分化の可能性

はじめに：間葉系幹細胞（MSC）を用いた研究は、免疫調節、抗炎症、および組織の再生特性のために増加しています。ただし、同種療法のための銀行の馬MSCの最良のソースについてはまだ合意はありません。この研究の目的は、同一のin vitro条件下での骨髄（BM-MSC）、脂肪組織（AT-MSC）および臍帯（UC-MSC）からの馬MSCの細胞培養と免疫表現型特性と分化の可能性を評価することでした。研究または同種療法セルバンクのためにこれらのソースを比較する。 方法：BM-MSC、AT-MSC、およびUC-MSCを培養し、骨形成、脂肪生成、軟骨形成分化の可能性についてin vitroで評価しました。さらに、MSCはフローサイトメトリーによりCD105、CD44、CD34、CD90、およびMHC-IIマーカーについて評価され、MHC-IIも免疫細胞化学によって評価されました。フローサイトメトリーの結果を解釈するために、ANOVAを使用して統計分析を実行しました。 結果：BM-MSC、AT-MSC、UC-MSCの収穫と培養手順は実現可能であり、BM-MSCで25日間、AT-MSCで15日、UCで26日まで平均細胞成長が可能でした。-mscs。すべてのソースからのMSCは、骨形成（BM-MSCおよびAT-MSCで10日後、UC-MSCで15日後）、脂肪生成（BM-MSCおよびAT-MSCで8日後、UC-で15日間に区別することができました。MSC）および軟骨形成（BM-MSC、AT-MSC、UC-MSCの21日後）系統。MSCは、CD105、CD44、CD90の高発現、およびCD34およびMHC-IIの低い発現または陰性発現を示しました。MHC-IIは、研究されたMSCのいずれにおいても免疫細胞化学技術によって検出されませんでした。 結論：BM、AT、およびUCは、馬MSCを採取するための実行可能なソースであり、それらの免疫表現型および多能性特性は、MSCを定義するための最小限の基準に達しました。MSCによるMHC-IIの発現が低いため、すべてのソースは、馬の同種療法を含む臨床試験で使用できます。ただし、BM-MSCとAT-MSCは最速の「in vitro」分化を示し、AT-MSCは3回目の通過まで最高の細胞成長を示しました。これらの調査結果は、BMおよびATがセルバンキングの目的で望ましい場合があることを示唆しています。

INTRODUCTION: Studies with mesenchymal stem cells (MSCs) are increasing due to their immunomodulatory, anti-inflammatory and tissue regenerative properties. However, there is still no agreement about the best source of equine MSCs for a bank for allogeneic therapy. The aim of this study was to evaluate the cell culture and immunophenotypic characteristics and differentiation potential of equine MSCs from bone marrow (BM-MSCs), adipose tissue (AT-MSCs) and umbilical cord (UC-MSCs) under identical in vitro conditions, to compare these sources for research or an allogeneic therapy cell bank. METHODS: The BM-MSCs, AT-MSCs and UC-MSCs were cultured and evaluated in vitro for their osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation potential. Additionally, MSCs were assessed for CD105, CD44, CD34, CD90 and MHC-II markers by flow cytometry, and MHC-II was also assessed by immunocytochemistry. To interpret the flow cytometry results, statistical analysis was performed using ANOVA. RESULTS: The harvesting and culturing procedures of BM-MSCs, AT-MSCs and UC-MSCs were feasible, with an average cell growth until the third passage of 25 days for BM-MSCs, 15 days for AT-MSCs and 26 days for UC-MSCs. MSCs from all sources were able to differentiate into osteogenic (after 10 days for BM-MSCs and AT-MSCs and 15 days for UC-MSCs), adipogenic (after 8 days for BM-MSCs and AT-MSCs and 15 days for UC-MSCs) and chondrogenic (after 21 days for BM-MSCs, AT-MSCs and UC-MSCs) lineages. MSCs showed high expression of CD105, CD44 and CD90 and low or negative expression of CD34 and MHC-II. The MHC-II was not detected by immunocytochemistry techniques in any of the MSCs studied. CONCLUSIONS: The BM, AT and UC are feasible sources for harvesting equine MSCs, and their immunophenotypic and multipotency characteristics attained minimal criteria for defining MSCs. Due to the low expression of MHC-II by MSCs, all of the sources could be used in clinical trials involving allogeneic therapy in horses. However, the BM-MSCs and AT-MSCs showed fastest ''in vitro'' differentiation and AT-MSCs showed highest cell growth until third passage. These findings suggest that BM and AT may be preferable for cell banking purposes.