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ヒトモノクローナル抗体薬物の非臨床薬物動態（PK）研究におけるタンパク質ベースの抗原の総濃度を定量化するために、汎用性のある免疫親和性液体クロマトグラフィー張力質量分析（LC-MS/MS）法が開発されました。この方法は、市販の抗ヒトFC領域抗体でコーティングされた磁気ビーズを使用して、抗原および抗体薬物の免疫複合体を捕捉し、LC-MS/MSを介した抗原由来トリプチンペプチドの消化と定量化と結合します。典型的な免疫アッセイまたは免疫親和性LC-MS/MSアッセイには、抗体薬物とは異なるエピトープを使用する抗原特異的抗体が必要ですが、この方法では市販の抗ヒトFC領域抗体のみが必要です。この方法は、RANKLに特異的なヒト化モノクローナル抗体（MAB）であるデノスマブの存在下で、核因子κBリガンド（RANKL）の総受容体活性化因子を定量化するために適用されました。このアッセイは、適切な適合として検証され、3.13-200Ng/mL RANKLの範囲で正確（<115％のインターバッチ精度）および正確（<15％、変動のインターバッチ係数）であることが判明しました。デノスマブによる干渉が回復を減少させたため、市販の酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）キットは総ランクLを決定することができませんでした。対照的に、抗体薬物はLC-MS/MS法に対する影響が少ない。この方法は、初期の薬物段階で他のタンパク質ベースの抗原アッセイを開発するための生体分析プラットフォームを提供するようになりました。
ヒトモノクローナル抗体薬物の非臨床薬物動態（PK）研究におけるタンパク質ベースの抗原の総濃度を定量化するために、汎用性のある免疫親和性液体クロマトグラフィー張力質量分析（LC-MS/MS）法が開発されました。この方法は、市販の抗ヒトFC領域抗体でコーティングされた磁気ビーズを使用して、抗原および抗体薬物の免疫複合体を捕捉し、LC-MS/MSを介した抗原由来トリプチンペプチドの消化と定量化と結合します。典型的な免疫アッセイまたは免疫親和性LC-MS/MSアッセイには、抗体薬物とは異なるエピトープを使用する抗原特異的抗体が必要ですが、この方法では市販の抗ヒトFC領域抗体のみが必要です。この方法は、RANKLに特異的なヒト化モノクローナル抗体（MAB）であるデノスマブの存在下で、核因子κBリガンド（RANKL）の総受容体活性化因子を定量化するために適用されました。このアッセイは、適切な適合として検証され、3.13-200Ng/mL RANKLの範囲で正確（<115％のインターバッチ精度）および正確（<15％、変動のインターバッチ係数）であることが判明しました。デノスマブによる干渉が回復を減少させたため、市販の酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）キットは総ランクLを決定することができませんでした。対照的に、抗体薬物はLC-MS/MS法に対する影響が少ない。この方法は、初期の薬物段階で他のタンパク質ベースの抗原アッセイを開発するための生体分析プラットフォームを提供するようになりました。
A versatile immunoaffinity liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method was developed to quantify the total concentration of a protein-based antigen in non-clinical pharmacokinetics (PK) studies of a human monoclonal antibody drug. The method combines using magnetic beads that have been coated with a commercial anti-human Fc region antibody to capture an immune complex of the antigen and antibody drug, with subsequent digestion and quantification of the antigen-derived tryptic peptide via LC-MS/MS. Although a typical immunoassay or an immunoaffinity LC-MS/MS assay requires an antigen-specific antibody that uses a different epitope from the antibody drug, this method requires only a commercial anti-human Fc region antibody. The method was applied to quantify total receptor activator of nuclear factor-κB ligand (RANKL) in the presence of denosumab, a humanized monoclonal antibody (mAb) specific to RANKL. The assay was validated as fit-for-purpose and found to be accurate (<115% interbatch accuracies) and precise (<15%, interbatch coefficient of variation) across a range of 3.13-200ng/mL RANKL. Commercial enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kit was not able to determine the total RANKL because interference by denosumab decreased recovery. In contrast, the antibody drug had less effect on the LC-MS/MS method. The method now provides a bioanalytical platform for developing other protein-based antigen assays in the early drug stage.
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