ビタミンD代謝産物用の敏感なLC/MS/MSメソッドの開発：1,25ジヒドロキシビタミンD2および3新しい誘導体化剤を使用した測定

活性ビタミンD代謝産物1,25-ジヒドロキシビタミンD2 [1,25-（OH）2-D2;Ergocalciferol]およびD3 [1,25-（OH）2-D3に由来します。コレカルシフェロールに由来する]は、循環で低レベルで見られ、測定には非常に敏感な方法が必要です。ラジオイムノアッセイ（RIA）は選択の方法でしたが、1,25-（OH）2-D2と-D3を区別するために必要な特異性がありませんが、液体クロマトグラフィータンデム質量分析（LC/MS/MS）メソッドには高い特異性と感度の利点があります。ここでは、シグナルを強化するために1,25-（OH）2-Dをイオン化するための新しい誘導体を比較し、ビタミンDを測定するための最も敏感なアッセイを提供します。LC/MS/MSの前に誘導体化のAmplifexジエン法を使用し、標準RIAメソッドと4-フェニル-1,2,4-2,4-2,4-3,5-Dione（Ptadize）のメソッド（PTAD）の4-フェニョール-3,5-Dione（PTAD）と比較しました。LC/MS/MS。20個のヒト血清サンプルの評価では、すべての方法は、標準の1,25-（OH）2-D2および-D3範囲の上位レベルに強く相関しています（AmplifexおよびRIA、PC = 0.97; AmplifexおよびPTAD、PC = 0.96）が、標準範囲の低レベルではそれほど強くありません（AmplifexおよびRIA、PC = 0.81;アッセイ間の感度の違い。Amplifexメソッドは、PTADメソッドよりも感度が高いと判断されました。これは、Amplifexメソッドではピーク領域が有意に高く、PTADよりも10倍高い信号対雑音比を提供しているためです。したがって、Amplifex LC/MS/MSメソッドは、最小のサンプルボリュームを使用しながら、1,25-（OH）2-D2および-D3を測定するために利用できる最も敏感で特定の方法です。

Active vitamin D metabolites 1,25-dihydroxyvitamin D2 [1,25-(OH)2-D2; derived from ergocalciferol] and D3 [1,25-(OH)2-D3; derived from cholecalciferol] are found in low levels in the circulation and require a very sensitive method for measurement. Radioimmunoassay (RIA) has been the method of choice, but it lacks the specificity needed to distinguish between 1,25-(OH)2-D2 and -D3, whereas liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) methods have the advantage of high specificity and sensitivity. Here, we compare a new derivative for ionizing 1,25-(OH)2-D to enhance the signal and provide the most sensitive assay for measuring vitamin D. We used the Amplifex diene method of derivatizing prior to LC/MS/MS and compared it to the standard RIA method and the 4-phenyl-1,2,4-triazole-3,5-dione (PTAD) method of derivatizing prior to LC/MS/MS. In the evaluation of 20 human serum samples, all methods correlated strongly across the upper levels of the standard 1,25-(OH)2-D2 and -D3 ranges (Amplifex and RIA, pc=0.97; Amplifex and PTAD, pc=0.96) but less strongly on the lower levels of the standard range (Amplifex and RIA, pc=0.81; Amplifex and PTAD, pc=0.65) suggesting differences in the sensitivities between the assays. The Amplifex method was determined to be more sensitive than the PTAD method, as peak areas were significantly higher for the Amplifex method and provided for a 10 fold higher signal-to-noise ratio than PTAD. Therefore, the Amplifex LC/MS/MS method is the most sensitive and specific method available for measuring 1,25-(OH)2-D2 and -D3 while using the smallest sample volume.