H7およびH9ヘマグルチニンの可溶性変異体を使用したインフルエンザAウイルスのシアル酸結合活性の特性評価

標的細胞へのインフルエンザウイルスの結合は、ウイルス表面タンパク質ヘマグルチニンによって媒介されます。インフルエンザAの細胞および組織のウイルスの結合部位の存在を決定するために、H7およびH9サブタイプの可溶性ヘマグルチニンは、ヘマグルチニン外染色体をヒト免疫グロブリンG（H7FCおよびH9FC）のFC部分に接続することにより生成されました。両方のキメラタンパク質は、シアル酸依存的に異なる細胞と組織に結合しました。H7FCとH9FCの間には、異なる哺乳類培養細胞と鳥類培養細胞の両方に結合し、異なるウイルス宿主種（七面鳥、鶏肉、豚）の呼吸上皮の凍結切片に結合した顕著な違いが観察されました。可溶性ヘマグルチニンの結合は、ウイルス粒子の結合に類似していたが、2つのシアル酸特異的植物レクチンと比較した場合、結合パターンの違いを示した。これらの発見は、H7FCおよびH9FCによって優先的に認識されているグリカン構造を反映していない植物レクチンによるシログリコンジュゲートの非常に狭い認識を明らかにする比較グリカンアレイ分析によって実証されました。したがって、可溶性ヘマグルチニンはシアル酸特異的レクチンとして機能し、一般的に使用される植物レクチンよりもインフルエンザウイルスHAの結合部位の存在のより信頼性の高い指標です。

Binding of influenza viruses to target cells is mediated by the viral surface protein hemagglutinin. To determine the presence of binding sites for influenza A viruses on cells and tissues, soluble hemagglutinins of the H7 and H9 subtype were generated by connecting the hemagglutinin ectodomain to the Fc portion of human immunoglobulin G (H7Fc and H9Fc). Both chimeric proteins bound to different cells and tissues in a sialic acid-dependent manner. Pronounced differences were observed between H7Fc and H9Fc, in the binding both to different mammalian and avian cultured cells and to cryosections of the respiratory epithelium of different virus host species (turkey, chicken and pig). Binding of the soluble hemagglutinins was similar to the binding of virus particles, but showed differences in the binding pattern when compared to two sialic acid-specific plant lectins. These findings were substantiated by a comparative glycan array analysis revealing a very narrow recognition of sialoglycoconjugates by the plant lectins that does not reflect the glycan structures preferentially recognized by H7Fc and H9Fc. Thus, soluble hemagglutinins may serve as sialic acid-specific lectins and are a more reliable indicator of the presence of binding sites for influenza virus HA than the commonly used plant lectins.