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The Journal of membrane biology1988Jul01Vol.103issue(1)

ヒトマクロファージでのパッチクランプ研究:2つのK+コンダクタンスのシングルチャネルと全細胞の特性評価

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文献タイプ:
  • Journal Article
  • Research Support, U.S. Gov't, Non-P.H.S.
概要
Abstract

さまざまな期間培養されたヒト末梢血単球は、全細胞およびシングルチャネルパッチクランプ記録技術を使用して研究されました。全細胞記録により、20 mVを超える電位での外側のk電流の活性化と、-60 mVの陰性の電位で存在する内向きの整流の両方が明らかになりました。EKの近くで外側の電流を活性化した電圧ステップによって引き出される尾電流は、外側の電流がKコンダクタンスによるものであることを示しています。巨視的な外向き電流のI-V曲線は、これらの細胞に存在する大型コンダクタンス(対称Kで240 PS)カルシウム活性化Kチャネルの平均単一チャネルI-V曲線と類似していた。茶とカリブドトキシンは、全細胞の外向き電流とシングルチャネル電流をブロックしました。切除された細胞付属のシングルチャネルデータは、カルシウム活性化Kチャネルが新鮮に隔離された単球には存在しないことを示しましたが、7日間培養されたマクロファージのパッチの85%を超えるパッチに存在していました。7日間以上培養されたヒトマクロファージの35%のみが、全細胞内電流を示しました。内向き電流は外部バリウムによってブロックされ、[k] oが増加すると増加しました。28 psのコンダクタンスを伴う内向きの単一チャネル電流は、内側の全細胞電流を示す細胞に存在していました。これらのシングルチャネル電流は、J774.1細胞で詳細に説明されているものと類似しています(L.C. McKinney&E.K。Gallin、J。MembraneBiol。103:41-53、1988)。

さまざまな期間培養されたヒト末梢血単球は、全細胞およびシングルチャネルパッチクランプ記録技術を使用して研究されました。全細胞記録により、20 mVを超える電位での外側のk電流の活性化と、-60 mVの陰性の電位で存在する内向きの整流の両方が明らかになりました。EKの近くで外側の電流を活性化した電圧ステップによって引き出される尾電流は、外側の電流がKコンダクタンスによるものであることを示しています。巨視的な外向き電流のI-V曲線は、これらの細胞に存在する大型コンダクタンス(対称Kで240 PS)カルシウム活性化Kチャネルの平均単一チャネルI-V曲線と類似していた。茶とカリブドトキシンは、全細胞の外向き電流とシングルチャネル電流をブロックしました。切除された細胞付属のシングルチャネルデータは、カルシウム活性化Kチャネルが新鮮に隔離された単球には存在しないことを示しましたが、7日間培養されたマクロファージのパッチの85%を超えるパッチに存在していました。7日間以上培養されたヒトマクロファージの35%のみが、全細胞内電流を示しました。内向き電流は外部バリウムによってブロックされ、[k] oが増加すると増加しました。28 psのコンダクタンスを伴う内向きの単一チャネル電流は、内側の全細胞電流を示す細胞に存在していました。これらのシングルチャネル電流は、J774.1細胞で詳細に説明されているものと類似しています(L.C. McKinney&E.K。Gallin、J。MembraneBiol。103:41-53、1988)。

Human peripheral blood monocytes cultured for varying periods of time were studied using whole-cell and single-channel patch-clamp recording techniques. Whole-cell recordings revealed both an outward K current activating at potentials greater than 20 mV and an inwardly rectifying K current present at potentials negative to -60 mV. Tail currents elicited by voltage steps that activated outward current reversed near EK, indicating that the outward current was due to a K conductance. The I-V curve for the macroscopic outward current was similar to the mean single-channel I-V curve for the large conductance (240 pS in symmetrical K) calcium-activated K channel present in these cells. TEA and charybdotoxin blocked the whole-cell outward current and the single-channel current. Excised and cell-attached single-channel data showed that calcium-activated K channels were absent in freshly isolated monocytes but were present in greater than 85% of patches from macrophages cultured for greater than 7 days. Only 35% of the human macrophages cultured for greater than 7 days exhibited whole-cell inward currents. The inward current was blocked by external barium and increased when [K]o increased. Inward-rectifying single-channel currents with a conductance of 28 pS were present in cells exhibiting inward whole-cell currents. These single-channel currents are similar to those described in detail in J774.1 cells (L.C. McKinney & E.K. Gallin, J. Membrane Biol. 103:41-53, 1988).

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