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背景：E型肝炎ウイルス（HEV）に適した培養システムがなければ、十分な天然ウイルスタンパク質を血清学的検査で使用するのが困難です。したがって、大量のHEV組換えタンパク質を経済的な方法で生成することが重要です。本研究では、血清サンプル中の抗Hev IgGを検出するために、HEVオープンリーディングフレーム（ORF）2タンパク質の2つの切り捨てられた形式を使用してELISAを開発しました。 方法：ORF2タンパク質の2つの切り捨てられた形態を大腸菌で発現し、Ni（2+） - キレートアフィニティクロマトグラフィー（Qiagen、ドイツ）によって精製しました。これらのタンパク質を使用して2つのELISAが開発され、220の血清サンプルでDia.pro Hev IgG ELISAキット（DIA.Pro。Italy）と比較されました。 結果：標的タンパク質の高収量は、コドンの最適化を通じて得られました。タンパク質の濃度と純度は、Amiconフィルター（EMD Millipore、米国）で改善されました。ドデシル硫酸ナトリウム - ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）および得られたタンパク質のウエスタンブロッティング分析は、ORF2.1（アミノ酸112-660）に対応する約60 kDaのタンパク質バンドと約55 kDaのタンパク質帯域を示しました。ORF2.2（アミノ酸112-607）。DIA.Pro Hev IgG ELISAキットと比較した2つの社内ELISAの肯定的な一致、否定的な一致、一致は、それぞれ87％、99.5％、および98.1％でした（Kappa = 0.899、P = 0.625）。 結論：新しく開発されたELISAは、血清サンプルで抗Hev IgGを検出するのに役立ち、Dia.pro Hev IgG ELISAキットと非常に一致しています。
背景：E型肝炎ウイルス（HEV）に適した培養システムがなければ、十分な天然ウイルスタンパク質を血清学的検査で使用するのが困難です。したがって、大量のHEV組換えタンパク質を経済的な方法で生成することが重要です。本研究では、血清サンプル中の抗Hev IgGを検出するために、HEVオープンリーディングフレーム（ORF）2タンパク質の2つの切り捨てられた形式を使用してELISAを開発しました。 方法：ORF2タンパク質の2つの切り捨てられた形態を大腸菌で発現し、Ni（2+） - キレートアフィニティクロマトグラフィー（Qiagen、ドイツ）によって精製しました。これらのタンパク質を使用して2つのELISAが開発され、220の血清サンプルでDia.pro Hev IgG ELISAキット（DIA.Pro。Italy）と比較されました。 結果：標的タンパク質の高収量は、コドンの最適化を通じて得られました。タンパク質の濃度と純度は、Amiconフィルター（EMD Millipore、米国）で改善されました。ドデシル硫酸ナトリウム - ポリアクリルアミドゲル電気泳動（SDS-PAGE）および得られたタンパク質のウエスタンブロッティング分析は、ORF2.1（アミノ酸112-660）に対応する約60 kDaのタンパク質バンドと約55 kDaのタンパク質帯域を示しました。ORF2.2（アミノ酸112-607）。DIA.Pro Hev IgG ELISAキットと比較した2つの社内ELISAの肯定的な一致、否定的な一致、一致は、それぞれ87％、99.5％、および98.1％でした（Kappa = 0.899、P = 0.625）。 結論：新しく開発されたELISAは、血清サンプルで抗Hev IgGを検出するのに役立ち、Dia.pro Hev IgG ELISAキットと非常に一致しています。
BACKGROUND: Without appropriate culture systems for hepatitis E virus (HEV), sufficient natural viral proteins are difficult to generate for use in serological tests. Therefore, it is important to produce large amounts of HEV recombinant proteins in an economical way. The present study developed ELISAs using 2 truncated forms of the HEV open reading frame (ORF) 2 protein in order to detect anti-HEV IgG in serum samples. METHODS: Two truncated forms of the ORF2 protein were expressed in Escherichia coli and were purified by Ni(2+)-chelate-affinity chromatography (Qiagen, Germany). Two ELISAs were developed using these proteins and were compared with DIA.PRO HEV IgG ELISA kit (DIA.PRO. Italy) in 220 serum samples. RESULTS: High yields of the target proteins were obtained through codon optimization. The concentration and purity of the proteins were improved with Amicon filters (EMD Millipore, USA). Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and Western blotting analysis of the resultant proteins showed a protein band of approximately 60 kDa corresponding to ORF2.1 (amino acids 112-660) and a protein band of approximately 55 kDa corresponding to ORF2.2 (amino acids 112-607). Positive agreement, negative agreement, and concordance of the 2 in-house ELISAs compared with DIA.PRO HEV IgG ELISA kit were 87%, 99.5%, and 98.1%, respectively (kappa=0.899, P=0.625). CONCLUSIONS: The newly developed ELISAs are useful for detecting anti-HEV IgG in serum samples and are highly concordant with DIA.PRO HEV IgG ELISA kit.
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