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単純ヘルペスウイルス1型（HSV）チミジンキナーゼ（TK）コード領域の下流の複数のポリアデニル化信号を含む一連のプラスミドを構築しました。使用されたシグナルは、Simianウイルス40（SV40）後期遺伝子、HSV TK遺伝子、およびSV40初期領域のAATAAA含有セグメントからのものでした。この最後のフラグメントは、SV40感染中にはまったくではなく、私たちのコンストラクトでポリアデニル化が不十分であることを示しています。すべてのプラスミドには、複製のSV40起源が含まれていました。プラスミドをCOS-1細胞にトランスフェクトしました。48時間後、細胞質RNAを分離し、S1ヌクレアーゼ保護アッセイを使用してTK mRNAの量と3'エンド構造を分析しました。すべてのコンストラクトで、すべてのポリアデニル化シグナルが使用されました。Poly（a）の数を増やすと、TKコード領域へのシグナル3 'は、最も弱いシグナルであっても、生成されたポリアデニル化RNAの総量に影響しませんでした。2つの信号間の距離を増やすと、5 '信号の使用が増加し、3'信号の使用が減少しました。5 'キャップと最初の信号間の距離を変更しても、信号使用には影響しませんでした。ポリアデニル化シグナル領域における細胞質mRNAの安定性、核RNA分布、および転写の分析は、異なるポリ（a）部位で終わるTK RNAの分布が、RNA代謝の他の側面ではなく、ポリ（a）シグナル選択の結果であることを示しています。ポリアデニル化シグナル認識の4つの可能なメカニズムについて説明します。
単純ヘルペスウイルス1型（HSV）チミジンキナーゼ（TK）コード領域の下流の複数のポリアデニル化信号を含む一連のプラスミドを構築しました。使用されたシグナルは、Simianウイルス40（SV40）後期遺伝子、HSV TK遺伝子、およびSV40初期領域のAATAAA含有セグメントからのものでした。この最後のフラグメントは、SV40感染中にはまったくではなく、私たちのコンストラクトでポリアデニル化が不十分であることを示しています。すべてのプラスミドには、複製のSV40起源が含まれていました。プラスミドをCOS-1細胞にトランスフェクトしました。48時間後、細胞質RNAを分離し、S1ヌクレアーゼ保護アッセイを使用してTK mRNAの量と3'エンド構造を分析しました。すべてのコンストラクトで、すべてのポリアデニル化シグナルが使用されました。Poly（a）の数を増やすと、TKコード領域へのシグナル3 'は、最も弱いシグナルであっても、生成されたポリアデニル化RNAの総量に影響しませんでした。2つの信号間の距離を増やすと、5 '信号の使用が増加し、3'信号の使用が減少しました。5 'キャップと最初の信号間の距離を変更しても、信号使用には影響しませんでした。ポリアデニル化シグナル領域における細胞質mRNAの安定性、核RNA分布、および転写の分析は、異なるポリ（a）部位で終わるTK RNAの分布が、RNA代謝の他の側面ではなく、ポリ（a）シグナル選択の結果であることを示しています。ポリアデニル化シグナル認識の4つの可能なメカニズムについて説明します。
We have constructed a series of plasmids containing multiple polyadenylation signals downstream of the herpes simplex virus type 1 (HSV) thymidine kinase (tk)-coding region. The signals used were from the simian virus 40 (SV40) late gene, the HSV tk gene, and an AATAAA-containing segment of the SV40 early region. This last fragment signals polyadenylation poorly in our constructs and not at all during SV40 infection. All plasmids contained the SV40 origin of replication. Plasmids were transfected into Cos-1 cells; after 48 h, cytoplasmic RNA was isolated and the quantity and 3'-end structure of tk mRNAs was analyzed by using S1 nuclease protection assays. In all constructs, all polyadenylation signals were used. Increasing the number of poly(A) signals 3' to the tk-coding region did not affect the total amount of polyadenylated RNA produced, even with the weakest signal. Increasing the distance between two signals caused an increase in the use of the 5' signal and a decrease in the use of the 3' signal. Changing the distance between the 5' cap and first signal did not affect signal use. Analyses of cytoplasmic mRNA stability, nuclear RNA distribution, and transcription in the polyadenylation signal region indicated that the distribution of tk RNAs ending at different poly(A) sites was the result of poly(A) signal choice, not other aspects of RNA metabolism. Four possible mechanisms of polyadenylation signal recognition are discussed.
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