アフィニティクロマトグラフィーとNi-NTAイモビル化酵素を使用したHisタグ付きタンパク質の結合定数の測定

アフィニティクロマトグラフィーは、タンパク質リガンド相互作用の結合定数を測定する1つの方法です。ここでは、Ni-NTA樹脂を使用して結合定数を測定して、Hisタグ付き酵素と前頭分析の方法を固定化する方法について説明します。固定化の他の方法は可能ですが、Hisタグ付きタンパク質とNi-NTAの間の強い親和性相互作用を使用すると、結果の結果が高速で簡単かつ穏やかな固定化方法をサポートします。アフィニティサポートが作成されると、前頭分析を使用して、タンパク質とさまざまな分析物との間の結合定数を測定できます。

Affinity chromatography is one way to measure the binding constants of a protein-ligand interaction. Here we describe a method of measuring a binding constant using Ni-NTA resin to immobilize a His-tagged enzyme and the method of frontal analysis. While other methods of immobilization are possible, using the strong affinity interaction between His-tagged proteins and Ni-NTA supports results in a fast, easy, and gentle method of immobilization. Once the affinity support is created, frontal analysis can be used to measure the binding constant between the protein and various analytes.