ハイブリッド化前：ビオチン - ストレプトアビジン検出システムに固有の内因性ビオチン結合活性を抑制する効率的な方法

内因性ビオチンまたはビオチン化タンパク質結合活性は、ビオチン - アビジン/ストレプトアビジン検出システムの大きな欠点です。ビオチン化二次抗体の複合体を検出するために使用されるアビジン/ストレプトアビジンコンジュゲートと、原発性抗体は、内因性ビオチンまたは非特異的シグナルにつながるビオチン化タンパク質に結合します。ウエスタンブロットでは、内因性ビオチンまたはビオチン化タンパク質結合活性は通常、〜72kDa、〜75kDa、および〜150kDaのタンパク質バンドの形で現れ、しばしば対象の信号を隠します。この問題を克服するために、ビオチン化二次抗体とストレプトアビジンコンジュゲートの以前のハイブリダイゼーションに基づく方法が開発されました。この方法は、ゼブラフィッシュ（ダニオレリオ）胚から抽出されたタンパク質の従来のビオチン - ストレプトアビジン法とともにテストされました。結果は、新しく開発された方法が、ビオチン - ストレプトアビジン検出システムに固有の内因性ビオチンまたはビオチン化タンパク質結合活性を効率的に抑制することを示しました。

Endogenous biotin or biotinylated protein binding activity is a major drawback to biotin-avidin/streptavidin detection system. The avidin/streptavidin conjugate used to detect the complex of the biotinylated secondary antibody and the primary antibody binds to endogenous biotin or biotinylated proteins leading to non-specific signals. In Western blot, the endogenous biotin or biotinylated protein binding activity is usually manifested in the form of ~72kDa, ~75kDa and ~150kDa protein bands, which often mask the signals of interest. To overcome this problem, a method based on prior hybridisation of the biotinylated secondary antibody and the streptavidin conjugate was developed. The method was tested alongside the conventional biotin-streptavidin method on proteins extracted from zebrafish (Danio rerio) embryos. Results showed that the newly developed method efficiently suppresses the endogenous biotin or biotinylated protein binding activity inherent to the biotin-streptavidin detection system.