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Pichia anomalaのフィターゼ（PPHY）には、熱安定性と酸安定性、広範な基質スペクトル、およびプロテアーゼの非感受性の必要な特性があり、飼料と食物添加剤として適切な候補になります。1,389-bp PPHY遺伝子は、PPICZαAでクローン化され、P。pastorisX33で細胞外発現したP. anomalaゲノムDNAから増幅されました。PPHYの3つのコピーが検出され、組換えP. pastorisの染色体DNAに統合されています。純粋なRpphyの電気泳動がそれに続くサイズ除外クロマトグラフィーは、これがN結合グリカンとして24.3％の部分を持つ〜420 kDaのホモヘキサマー糖タンパク質であることを確認しました。Rpphyの温度とpH最適は60°Cと4.0で、内因性酵素と同様です。rpphyの運動特性k（m）、v（max）、k（cat）、k（cat）/k（m）は0.2±0.03 mm、78.2±1.43 nmol mg（-1）s（-1）です。、65,655±10.92 s（-1）、および328.3±3.12μm（-1）s（-1）。中成分の最適化により、内因性酵母よりもRpphy生産が21.8倍改善されました。Shake Flasksで達成されたRpphyの力価は、実験室の発酵槽でも維持される可能性があります。Rpphyは、分泌タンパク質の総タンパク質の57.1％を培地に占めています。酵素は、脱子化に加えて、大豆タンパク質のアレルギー性タンパク質グリシニンの分画に有用であることがわかっています。
Pichia anomalaのフィターゼ（PPHY）には、熱安定性と酸安定性、広範な基質スペクトル、およびプロテアーゼの非感受性の必要な特性があり、飼料と食物添加剤として適切な候補になります。1,389-bp PPHY遺伝子は、PPICZαAでクローン化され、P。pastorisX33で細胞外発現したP. anomalaゲノムDNAから増幅されました。PPHYの3つのコピーが検出され、組換えP. pastorisの染色体DNAに統合されています。純粋なRpphyの電気泳動がそれに続くサイズ除外クロマトグラフィーは、これがN結合グリカンとして24.3％の部分を持つ〜420 kDaのホモヘキサマー糖タンパク質であることを確認しました。Rpphyの温度とpH最適は60°Cと4.0で、内因性酵素と同様です。rpphyの運動特性k（m）、v（max）、k（cat）、k（cat）/k（m）は0.2±0.03 mm、78.2±1.43 nmol mg（-1）s（-1）です。、65,655±10.92 s（-1）、および328.3±3.12μm（-1）s（-1）。中成分の最適化により、内因性酵母よりもRpphy生産が21.8倍改善されました。Shake Flasksで達成されたRpphyの力価は、実験室の発酵槽でも維持される可能性があります。Rpphyは、分泌タンパク質の総タンパク質の57.1％を培地に占めています。酵素は、脱子化に加えて、大豆タンパク質のアレルギー性タンパク質グリシニンの分画に有用であることがわかっています。
The phytase (PPHY) of Pichia anomala has the requisite properties of thermostability and acidstability, broad substrate spectrum, and protease insensitivity, which make it a suitable candidate as a feed and food additive. The 1,389-bp PPHY gene was amplified from P. anomala genomic DNA, cloned in pPICZαA, and expressed extracellularly in P. pastoris X33. Three copies of PPHY have been detected integrated into the chromosomal DNA of the recombinant P. pastoris. The size exclusion chromatography followed by electrophoresis of the pure rPPHY confirmed that this is a homohexameric glycoprotein of ~420 kDa with a 24.3 % portion as N-linked glycans. The temperature and pH optima of rPPHY are 60 °C and 4.0, similar to the endogenous enzyme. The kinetic characteristics K(m), V(max), K(cat), and K(cat)/K(m) of rPPHY are 0.2 ± 0.03 mM, 78.2 ± 1.43 nmol mg(-1) s(-1), 65,655 ± 10.92 s(-1), and 328.3 ± 3.12 μM(-1) s(-1), respectively. The optimization of medium components led to a 21.8-fold improvement in rPPHY production over the endogenous yeast. The rPPHY titer attained in shake flasks could also be sustained in the laboratory fermenter. The rPPHY accounts for 57.1 % of the total secreted protein into the medium. The enzyme has been found useful in fractionating allergenic protein glycinin from soya protein besides dephytinization.
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