ヒト血漿中のアルテスネートとその代謝物ディヒドロアルテミシニンとジヒドロアルテミシニングルクロニドの同時定量化のためのLC-MS/MSメソッド

アルテミシニンの半核誘導体であるArtesunate（AS）は、水に容易に溶けやすく、重度のマラリアの非経口治療のための製剤に簡単に使用できます。活性な代謝産物ジヒドロアルテミシニン（DHA）に急速に加水分解され、主にグルクロン酸後の胆道排泄によって排除されます。AS代謝と薬物動態を体系的に調査するために、ASとその代謝産物DHAおよびDHAグルクロニド（DHAG）の同時定量化のための新規液体クロマトグラフィータンデム質量分析（LC-MS/MS）法を発症しました。以前の方法と比較して、我々の方法には、内部標準として新しく合成された安定同位体標識アナログを使用したグルクロニド代謝産物の定量化が初めて含まれます。サンプル調製は、96ウェルプレート形式の高スループット固相抽出により、50μLの血漿でのみ行われました。分析物の分離は、ポロシェル120 EC-C18カラムで達成されました（50*2.1 mm、2.7μm、Agilent Technologies、Waldbronn、Germany）。この方法は、FDAガイドラインに従って検証されました。キャリブレーション曲線は、1〜2,500 nm（0.4-961.1 ng/ml）、165〜16,500 nm（46.9-4,691.8 ng/ml）、および4〜10,000 nm（1.8-4,604.7 ng/ml）の範囲全体で線形でした。、DHA、およびDHAG、それぞれ。公称値と測定値の間の偏差として決定される、バッチ内およびインターバッチの精度は、それぞれ-5.7から3.5％、2.7〜5.8％の範囲でした。アッセイの変動は、バッチ内およびインターバッチアプローチで1.5〜10.9％の範囲でした。すべての分析物は、85％を超える抽出回収率を示しました。この方法は、AS治療中の患者からの血漿サンプルに正常に適用されました。

Artesunate (AS), a hemisuccinate derivative of artemisinin, is readily soluble in water and can easily be used in formulations for parenteral treatment of severe malaria. AS is rapidly hydrolyzed to the active metabolite dihydroartemisinin (DHA) and primarily eliminated by biliary excretion after glucuronidation. To investigate systematically the AS metabolism and pharmacokinetics, a novel liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for the simultaneous quantification of AS and its metabolites DHA and DHA glucuronide (DHAG) in human plasma samples was developed. Compared to previous methods, our method includes for the first time the quantification of the glucuronide metabolite using a newly synthesized stable isotope-labeled analogue as internal standard. Sample preparation was performed with only 50 μL plasma by high-throughput solid-phase extraction in the 96-well plate format. Separation of the analytes was achieved on a Poroshell 120 EC-C18 column (50*2.1 mm, 2.7 μm, Agilent Technologies, Waldbronn, Germany). The method was validated according to FDA guidelines. Calibration curves were linear over the entire range from 1 to 2,500 nM (0.4-961.1 ng/mL), 165 to 16,500 nM (46.9-4,691.8 ng/mL), and 4 to 10,000 nM (1.8-4,604.7 ng/mL) for AS, DHA, and DHAG, respectively. Intra- and interbatch accuracy, determined as a deviation between nominal and measured values, ranged from -5.7 to 3.5% and from 2.7 to 5.8%, respectively. The assay variability ranged from 1.5 to 10.9% for intra- and interbatch approaches. All analytes showed extraction recoveries above 85%. The method was successfully applied to plasma samples from patients under AS treatment.