インスリンとインスリン様成長因子の受容体間の免疫学的関係Iインスリン受容体を含むハイブリッドを含むインスリン様成長因子I受容体の構造的不均一性の証拠

インスリンおよびインスリン様成長因子I（IGF-I）の受容体は、一次シーケンスおよび全体的な構造で密接に関連しています。我々は、さまざまな組織および細胞株におけるIGF-I受容体との抗（インスリン受容体）モノクローナル抗体の反応性をテストすることにより、これらの受容体間の免疫学的関係を調べました。6つの異なるエピトープの抗体は、125-IGF-I結合の阻害、125-IGF-I-受容体複合体の沈殿、または結合アッセイ前の組織抽出物からの受容体の免疫剥離によって示されるように、IGF-I受容体のサブフラクションと反応しました。免疫反応性および非免疫反応性の両方のサブフラクションは、IGF-Iとインスリンの相対的な親和性の観点から、「古典的な」IGF-I受容体の予想される特性を示しました。免疫反応性であった総IGF-I受容体の割合は、異なる細胞タイプで変化し、約です。HEP G2細胞で40％、胎盤膜で35〜40％、IM-9細胞で75-85％。免疫反応性画分は、対応する無傷の細胞または膜よりも可溶化受容体の方がやや高かった。以前に記載されたモノクローナル抗体であるAlpha-IR-3は、IGF-I受容体に特異的に、すべての製剤で80％以上のIGF-I結合を阻害しました。分子内（クラスI）の拡散結合を減少させると報告された条件下で溶解した胎盤受容体をジチオトレイトール（DTT）で前処理した場合、IGF-I受容体の免疫反応性は廃止されましたが、IGF-I結合全体はほとんど影響を受けませんでした。同じ条件下で、インスリン受容体は完全に免疫反応性のままでした。溶解した受容体調製物がゲルろ過によって分画された場合、IGF-Iとインスリン受容体の両方が同一の可動性の対称的なピークとして走行しました。DTT処理後、IGF-I受容体は、免疫反応性ではない低分子質量型に部分的に変換されました。インスリン受容体のピークは、はるかに顕著な歪みがはるかに少ないことを示し、すべての画分で完全に免疫反応性のままでした。抗（インスリン受容体）抗体はIGF-I受容体ポリペプチドと直接反応せず、IGF-I受容体のサブフラクションの見かけの免疫反応性は、細胞抽出物および中のインスリン受容体との物理的関連を反映していると結論付けられています。無傷の細胞。この関連の最も可能性の高い根拠は、インスリン受容体ポリペプチドの半分（アルファベータ）と、ネイティブ内のIGF-I受容体ポリペプチドの他の（アルファ 'ベータ'）を含む「ハイブリッド」受容体であるように見えます（アルファベータベータ 'アルファ'アルファ'）ヘテロテトラマリック構造。

The receptors for insulin and insulin-like growth factor-I (IGF-I) are closely related in primary sequence and overall structure. We have examined the immunological relationships between these receptors by testing the reactivity of anti-(insulin receptor) monoclonal antibodies with IGF-I receptors in various tissues and cell lines. Antibodies for six distinct epitopes reacted with a subfraction of IGF-I receptors, as shown by inhibition of 125I-IGF-I binding, precipitation of 125I-IGF-I-receptor complexes or immunodepletion of receptor from tissue extracts before binding assays. Both immunoreactive and non-immunoreactive subfractions displayed the expected properties of 'classical' IGF-I receptors, in terms of relative affinities for IGF-I and insulin. The proportion of total IGF-I receptors which was immunoreactive varied in different cell types, being approx. 40% in Hep G2 cells, 35-40% in placental membranes and 75-85% in IM-9 cells. The immunoreactive fraction was somewhat higher in solubilized receptors than in the corresponding intact cells or membranes. A previously described monoclonal antibody, alpha-IR-3, specific for IGF-I receptors, inhibited IGF-I binding by more than 80% in all preparations. When solubilized placental receptors were pretreated with dithiothreitol (DTT) under conditions reported to reduce intramolecular (class I) disulphide bonds, the immunoreactivity of IGF-I receptors was abolished although total IGF-I binding was little affected. Under the same conditions insulin receptors remained fully immunoreactive. When solubilized receptor preparations were fractionated by gel filtration, both IGF-I and insulin receptors ran as symmetrical peaks of identical mobility. After DTT treatment, the IGF-I receptor was partially converted to a lower molecular mass form which was not immunoreactive. The insulin receptor peak showed a much less pronounced skewing and remained fully immunoreactive in all fractions. It is concluded that the anti- (insulin receptor) antibodies do not react directly with IGF-I receptor polypeptide, and that the apparent immunoreactivity of a subfraction of IGF-I receptors reflects their physical association with insulin receptors, both in cell extracts and in intact cells. The most likely basis for this association appears to be a 'hybrid' receptor containing one half (alpha beta) of insulin receptor polypeptide and the other (alpha' beta') of IGF-I receptor polypeptide within the native (alpha beta beta' alpha') heterotetrameric structure.