大腸菌tRNA（FMET）の配列を持つRNAおよびDNAポリマーの合成と機能的評価

段階的な固相化学合成は、大腸菌tRNA（FMET）の配列に関連する長いRNAおよびDNAポリマーを提供しています。5 '半分のtRNA分子の配列に対応する34-リボヌクレオチドオリゴマーは合成され、ゲル精製、末端ヌクレオチド測定、および配列分析によって特徴付けられています。この34ヌクレオチドオリゴマーは、TRNA（FMET）の3'-HALF分子の配列に対応するリン酸化43-リボヌクレオチドオリゴマーとのRNA-リガーゼ触媒反応の受容体として機能します。TRNA（FMET）の配列を持つDNA分子は、3'末端リボアデノシン残基を備えた76-デオキシリボヌクレオチドオリゴマーであり、Tに置き換えられたすべてのU残基は、これらのポリマーをすべて2'-ヒドロキシル基を欠くオリゴデオキシリボヌクレオチドと比較しています。3'-ターミナル2'-OH、修飾ヌクレオシドと大腸菌tRNA（FMET）を欠くオリゴリボヌクレオチド。全RNA 77-ヌクレオチドオリゴマーは、大腸菌からメチオニンを含む大腸菌メチオニル-TRNAシンテターゼ調製によりアミノアシル化され、酵母抽出物を使用してA37位置でスレオニル化します。TDNA（PHE）とTDNA（LYS）を使用したKhanとRoeによる研究と一致して、Ra77-DNA（FMET）はアミノアシル化でき、予備的な証拠は、それが少量でスレオニル化できることを示唆しています。速度論的データは、3 '末端ヌクレオチドを除き、TRNA（FMET）のアミノアシル化が2'-ヒドロキシル基の存在に依存しないという概念を支持しています。

Stepwise, solid-phase chemical synthesis has provided long RNA and DNA polymers related to the sequence of Escherichia coli tRNA(fMet). The 34-ribonucleotide oligomer corresponding to the sequence of the 5'-half tRNA molecule has been synthesized and then characterized by gel purification, terminal nucleotide determinations and sequence analysis. This 34-nucleotide oligomer serves as an acceptor in the RNA-ligase-catalyzed reaction with a phosphorylated 43-ribonucleotide oligomer corresponding to the sequence of the 3'-half molecule of tRNA(fMet). The DNA molecule having the sequence of tRNA(fMet) is a 76-deoxyribonucleotide oligomer with a 3'-terminal riboadenosine residue and all U residues replaced by T. These polymers have been compared with an oligodeoxyribonucleotide lacking all 2'-hydroxyl groups except for the 3'-terminal 2'-OH, an oligoribonucleotide lacking modified nucleosides and E. coli tRNA(fMet). The all-RNA 77-nucleotide oligomer can be aminoacylated by E. coli methionyl-tRNA synthetase preparation from E. coli with methionine and threonylated in the A37 position using a yeast extract. In agreement with work by Khan and Roe using tDNA(Phe) and tDNA(Lys), the rA77-DNA(fMet) can be aminoacylated, and preliminary evidence suggests that it can be threonylated to a small extent. Kinetic data support the notion that aminoacylation of tRNA(fMet) does not depend on the presence of 2'-hydroxyl groups with the exception of that in the 3'-terminal nucleotide.