ジャガイモアミロプラストアルファ - グルカンホスホリラーゼとその輸送ペプチドの構造をコードするcDNAの分子クローニング

104 kDaサブユニットの二量体であるポテト塊茎アルファグルカンホスホリラーゼ[EC 2.4.1.1]のタイプLアイソザイムは、アミロプラストに区画化されています。未熟なジャガイモの塊茎のcDNAライブラリーからこのアイソザイムをコードするほぼフルレングスcDNAをクローニングしました。シーケンスは、部分的なゲノムクローンによって補完されました。転写開始部位は、プライマー拡張実験によって、翻訳開始ATGコドンから上流の43の塩基であることが特定されました。このメッセージは、966アミノ酸残基のポリペプチドをコードし、そのうち50残基はN末端伸長ペプチドを構成し、916残基が成熟タンパク質を構成します。成熟タンパク質領域では、ヌクレオチド配列は化学的に決定されたアミノ酸配列と一致しています（Nakano、K。＆Fukui、T。（1986）J。Biol。Chem。261、8230-8236）。N末端伸長は、核エンコード葉緑体タンパク質の輸送ペプチドの特徴を帯びているため、アミロプラストの輸送ペプチドと見なされます。このペプチドには、塩基性アミノ酸（5アルギニン、3つのリジン、5つのヒスチジン）とヒドロキシルアミノ酸（7セリンと5つのスレオニン）が豊富ですが、酸性アミノ酸がありません。したがって、これはこれまでに報告された最も基本的な輸送ペプチドの1つに分類されています。

The type L isozyme of potato tuber alpha-glucan phosphorylase [EC 2.4.1.1], a dimer of 104-kDa subunits, is compartmentalized in the amyloplast. We have cloned a nearly full-length cDNA encoding this isozyme from a cDNA library of immature potato tuber. The sequence was supplemented by a partial genomic clone. The transcription initiation site was identified by a primer extension experiment to be 43 bases upstream from the translation initiation ATG codon. The message encodes a polypeptide of 966 amino acid residues, of which 50 residues constitute an N-terminal extended peptide and 916 residues make up the mature protein. In the mature protein region, the nucleotide sequence is consistent with the chemically determined amino acid sequence (Nakano, K. & Fukui, T. (1986) J. Biol. Chem. 261, 8230-8236). The N-terminal extension bears characteristic features of the transit peptides of nuclear-encoded chloroplastic proteins, and is therefore regarded as a transit peptide for the amyloplast. This peptide is rich in basic amino acids (5 arginines, 3 lysines, and 5 histidines) and hydroxylic amino acids (7 serines and 5 threonines), but lacks acidic amino acids. It is therefore classified as one of the most basic transit peptides so far reported.