Aspergillus oryzaeの大規模染色体セグメントの標的タンデム重複

ここでは、オレイザエのアスペルギルスの大きな染色体セグメントのターゲットタンデム重複の最初の成功した構造について説明します。ターゲットを絞ったタンデム染色体重複は、タンデム染色体の重複を標的とした領域の上流と標的領域の3'に削除されたPYRGを標的とした領域の5'DELETED PYRGを使用した株を使用して達成されました。したがって、染色体8の模倣領域近くの210 kBの標的染色体重複を担う株と、染色体2の700 kb領域の標的タンデム染色体重複を持つ株が正常に構築されました。タンデム染色体の複製を担う株は、親株の再生されたプロトプラストから効率的に得られました。しかし、染色体の重複の生成は、I-SCEIによる二本鎖切断（DSB）の導入に依存しませんでした。これらの株の染色体の重複は、非選択的条件下で5世代の培養後に安定して維持されました。染色体2の700 kb領域におけるタンデム染色体の重複を持つ株は、固体培養で非常に増加したプロテアーゼ活性を示し、大きな染色体セグメントの重複が有用な新しい繁殖技術と遺伝子分析方法になる可能性があることを示しています。

We describe here the first successful construction of a targeted tandem duplication of a large chromosomal segment in Aspergillus oryzae. The targeted tandem chromosomal duplication was achieved by using strains that had a 5'-deleted pyrG upstream of the region targeted for tandem chromosomal duplication and a 3'-deleted pyrG downstream of the target region. Consequently,strains bearing a 210-kb targeted tandem chromosomal duplication near the centromeric region of chromosome 8 and strains bearing a targeted tandem chromosomal duplication of a 700-kb region of chromosome 2 were successfully constructed. The strains bearing the tandem chromosomal duplication were efficiently obtained from the regenerated protoplast of the parental strains. However, the generation of the chromosomal duplication did not depend on the introduction of double-stranded breaks(DSBs) by I-SceI. The chromosomal duplications of these strains were stably maintained after five generations of culture under nonselective conditions. The strains bearing the tandem chromosomal duplication in the 700-kb region of chromosome 2 showed highly increased protease activity in solid-state culture, indicating that the duplication of large chromosomal segments could be a useful new breeding technology and gene analysis method.