クロストリジウムディフィシルからのFICタンパク質のタンパク質の発現、特性評価、結晶化、および予備X線結晶学的分析

タンパク質の Fic ドメインは、最も単純な原核生物から動物に至るまで、自然界に豊富に存在します。興味深いことに、グラム陰性菌の 2 つの病原性因子に見られる Fic ドメインが、ATP から小型宿主 GTPase への AMP 部分の転移を触媒することが最近実証されました。この翻訳後修飾はかなりの関心を集めており、病理学および生理学におけるアデニリル化の役割が明らかになりつつあります。この研究は、グラム陽性菌クロストリジウム ディフィシルの新たに同定された Fic タンパク質の構造特性を評価することを目的としていました。C.ディフィシルFicの構成的に活性な阻害性ヘリックス変異体を大腸菌で過剰発現させ、蒸気拡散法により精製、結晶化させた。予備的な X 線結晶構造解析では、シンクロトロン X 線源で結晶が少なくとも 1.68 Å の解像度で回折することが示されています。結晶は斜方晶系空間群 P212121 に属し、単位胞パラメータ a=45.6、b=80.8、c=144.7 Å、α=β=γ=90°でした。非対称単位あたり 2 つの分子は、マシューズ係数 2.37 Å3 Da(-1) および溶媒含有量 48% に相当します。

Fic domains in proteins are found in abundance in nature from the simplest prokaryotes to animals. Interestingly, Fic domains found in two virulence factors of Gram-negative bacteria have recently been demonstrated to catalyse the transfer of the AMP moiety from ATP to small host GTPases. This post-translational modification has attracted considerable interest and a role for adenylylation in pathology and physiology is emerging. This work was aimed at the structural characterization of a newly identified Fic protein of the Gram-positive bacterium Clostridium difficile. A constitutively active inhibitory helix mutant of C. difficile Fic was overexpressed in Escherichia coli, purified and crystallized by the vapour-diffusion technique. Preliminary X-ray crystallographic analysis shows that the crystals diffract to at least 1.68 Å resolution at a synchrotron X-ray source. The crystals belonged to the orthorhombic space group P2₁2₁2₁, with unit-cell parameters a=45.6, b=80.8, c=144.7 Å, α=β=γ=90°. Two molecules per asymmetric unit corresponds to a Matthews coefficient of 2.37 Å3 Da(-1) and a solvent content of 48%.