LC-MS/MSによる血清における総テストステロンの定量測定

総テストステロンの信頼できる測定は、成人と子供に影響を与える多くのホルモン関連疾患の診断、治療、予防に不可欠です。ヒト血清におけるテストステロン測定のための質量分析法が慎重に開発され、徹底的に検証されました。100μLの血清からの総テストステロンは、酸性緩衝液を含むタンパク質から放出され、2つの連続液体液体抽出ステップによって分離されます。最初の抽出ステップは、酢酸エチルとヘキサンを使用して、酸性緩衝液から脂質画分を分離します。有機相は乾燥し、基本的なバッファー溶液で再構成されます。2番目の抽出ステップでは、ヘキサン抽出によりリン脂質やその他の成分が除去されます。液体クロマトグラフィー - アイソトピック希釈タンデム質量分析は、総テストステロンを定量化するために使用されます。サンプルの準備は、96拡大プレートを備えた液体処理システムで自動的に実行されます。検出の方法は9.71 pmol/l（0.280 ng/dl）であり、メソッド平均パーセントバイアスは参照メソッドと有意な違いはありません。この方法のパフォーマンスは、濃度0.527、7.90、および30.7 nmol/L（15.2、228、および886 ng//l（7.90、および30.7 ng/L）での品質制御プールの3.7から4.8％の範囲の2年間の方法の精度と一致することが証明されています。DL）、それぞれ。この方法は、すべての臨床関連濃度にわたってヒト血清のテストステロン測定のために、一貫して高い精度と優れた精度を提供します。

Reliable measurement of total testosterone is essential for the diagnosis, treatment and prevention of a number of hormone-related diseases affecting adults and children. A mass spectrometric method for testosterone determination in human serum was carefully developed and thoroughly validated. Total testosterone from 100 μL serum is released from proteins with acidic buffer and isolated by two serial liquid-liquid extraction steps. The first extraction step isolates the lipid fractions from an acidic buffer solution using ethyl acetate and hexane. The organic phase is dried down and reconstituted in a basic buffer solution. The second extraction step removes the phospholipids and other components by hexane extraction. Liquid chromatography-isotopic dilution tandem mass spectrometry is used to quantify the total testosterone. The sample preparation is automatically conducted in a liquid-handling system with 96-deepwell plates. The method limit of detection is 9.71 pmol/L (0.280 ng/dL) and the method average percent bias is not significantly different from reference methods. The performance of this method has proven to be consistent with the method precision over a 2-year period ranging from 3.7 to 4.8% for quality control pools at the concentrations 0.527, 7.90 and 30.7 nmol/L (15.2, 228, and 886 ng/dL), respectively. This method provides consistently high accuracy and excellent precision for testosterone determination in human serum across all clinical relevant concentrations.