培養された哺乳類細胞におけるノッチ活性化の監視：ルシフェラーゼ補完イメージングアッセイ

Notchの活性化と切断は、Notch細胞内ドメイン（NICD）を放出します。これは、DNA結合パートナーCSLと関連してコアクチベーターMAMLと追加の補因子を動員して最終的に標的遺伝子発現を活性化する核に移行します。NICDとこれらの要因の間の特定の相互作用を活用して、ライブセルのリアルタイムでノッチ活性化を定量的に監視するために、ルシフェラーゼ補完イメージング（LCI）ベースのレポーターシステムを開発しました。この章では、タンパク質相互作用を測定し、受容体の活性化の詳細な運動分析とさまざまな刺激に対する反応を実行するためのNotch LCIレポーターの使用について説明します。

Notch activation and cleavage releases the Notch intracellular domain (NICD), which translocates to the nucleus, where it associates with its DNA-binding partner CSL to recruit the coactivator MAML and additional cofactors to ultimately activate target gene expression. Taking advantage of the specific interaction between NICD and these factors, we have developed a luciferase complementation imaging (LCI)-based reporter system to quantitatively monitor Notch activation in real time in live cells. In this chapter, we describe the use of Notch LCI reporters for measuring protein interactions and performing detailed kinetic analyses of receptor activation and its responses to various stimuli.