分離された灌流心臓の冠動脈排水におけるナノモル濃度の物質を検出するための液体クロマトグラフィマス分光法（LC-MS）の使用

心臓が伸びると、「遅い力応答」または「SFR」として知られる数分間にわたってゆっくりと発達する2番目のフェーズが続くストレッチと一致する力の急激な増加があります。SFRには、Ca（2+）過渡現象のゆっくりとした増加が伴いますが、基礎となる細胞メカニズムはまだ議論されています。したがって、SFR中にストレッチ依存性Ca（2+）流入を説明できるストレッチが放出されたオートクリン/パラクリン因子を放出するかどうかを調査するために、単純なバイオアッセイシステムを考案しました。私たちの分析は、タンデム質量分析を使用したメタボロミクスアプローチに基づいており、分泌された化合物を高解像度および正確な質量で液体クロマトグラフィー質量分析（LC-MS/MS）によって分析しました。私たちのバイオアッセイは、直列の2つの孤立した心臓製剤で構成されていました。持続的なストレッチは、「上流の」心臓から収集された冠動脈排出物に灌流された、ストレッチされていない「下流」の骨折の性能を監視する一方で、「上流の」langendorff充填心臓に適用されました。「非ストレッチ」から「ストレッチされた」冠動脈排出液に切り替えると、「下流」の骨折でCa（2+）過渡現象（340/380）Fura-2比）の振幅は、0.87±0.04から0.94±0.05（pに増加しました。<0.05、n = 4）、および活性応力（mn mm（-2））は15.4±1.5から19.2±1.9（p <0.01、n = 13）で、1つまたは複数の陽性の変異性因子のストレッチ依存性放出を確認します（s）。因子を特定するために、冠動脈排出サンプルを固相抽出（SPE）処理により濃縮し、凍結乾燥し、Thermo Finnigan LTQ FT-ICRハイブリッド質量分析計を使用して分析しました。微分プロファイルデータが最初に取得され、その後、伸縮した冠状排出サンプルの上昇レベルで特定の化合物を標的としました。次に、ペプチドと小分子の微分分析を実行できる統計ソフトウェアを使用して、微分LC-MS/MSの結果の定量的および統計分析を実行しました。伸縮済み排水と伸ばされていない排水との間で異なる多くの物質が特定されました（p <0.01）。

When the heart is stretched there is an abrupt increase in force that coincides with the stretch that is then followed by a second phase that develops slowly over a period of minutes, known as the "slow force response", or "SFR". The SFR is accompanied by a slow increase in the Ca(2+) transients, but the underlying cellular mechanisms are still debated. We therefore devised a simple bioassay system to investigate whether stretch released autocrine/paracrine factors that could explain the stretch-dependent Ca(2+) influx during the SFR. Our analysis was based around a metabolomics approach using tandem mass spectrometry whereby secreted compounds were analysed by liquid chromatography mass spectrometry (LC-MS/MS) at high resolution and accurate mass. Our bioassay consisted of two isolated cardiac preparations in series. A sustained stretch was applied to an "upstream" Langendorff-perfused heart, whilst monitoring the performance of an un-stretched, "downstream" trabecula perfused with coronary effluent collected from the "upstream" heart. Switching from "un-stretched" to "stretched" coronary effluent increased the amplitude of the Ca(2+) transients (340/380) fura-2 ratio) in the "downstream" trabeculae from 0.87 ± 0.04 to 0.94 ± 0.05 (p < 0.05, n = 4), and active stress (mN mm(-2)) from 15.4 ± 1.5 to 19.2 ± 1.9 (p < 0.01, n = 13), confirming the stretch-dependent release of one or more positively inotropic factor(s). To identify the factor, coronary effluent samples were concentrated by Solid Phase Extraction (SPE) treatment, lyophilised, then analysed using a Thermo Finnigan LTQ FT-ICR hybrid mass spectrometer. Differential profile data was obtained initially followed by targeting specific compounds at elevated levels in the stretched coronary effluent samples. Quantitative and statistical analyses of the differential LC-MS/MS results were then carried out using SIEVE 2.1, statistical software capable of performing differential analysis of peptides and small molecules. A number of substances were identified that were different between stretched and unstretched effluents (p < 0.01).