内側の血液網膜障壁でのクロニジンの網膜摂取におけるキャリア媒介輸送の関与

本研究では、内部BRBを横切る血液から網膜への輸送を、重度の網膜疾患の治療のために神経保護効果を示すと予想されるクロニジンについて調査されました。in vivo研究では、[（3）h]クロニジンの統合プロット分析は、網膜における457μl/（min・g網膜）の明らかな流入透過性クリアランスを示しました。in vivo阻害研究は、BRBでのクロニジンの血液から網膜への輸送が40 mMの濃度でクロニジン、ピリラミン、プロプラノロール以来、有機陽イオン感受性であることを示唆しています。（3）H]クロニジン、およびRUIに対する阻害効果も、ベラパミルによって3 mMの濃度で示されました。内部BRBのin vitroモデル細胞株であるTR-IBRB2細胞を用いたin vitro研究は、得られた結果が実証されて以来、内側BRBでのクロニジンの血液から網膜輸送に介入媒介輸送が関与していることを示唆しています。、温度、pH、および濃度依存性[（3）h]クロニジンの取り込み、kmは286μmで。in vitro阻害研究では、[（3）H]クロニジンの取り込みは、クロニジン、ベラパミル、ピリラミン、プロプラノロールなどのいくつかの有機カチオンによって有意に減少し、わずかまたはNOにもかかわらず、200μMベラパミルによって競合的に阻害されました。有機陰イオンで有意な変化が生成されます。さらに、よく知られている有機陽イオン輸送体の典型的な基質と阻害剤は、[（3）h]クロニジンの取り込みに有意な影響を与えなかったため、内部BRBを横切るクロニジンの輸送における新規トランスポーター分子の関与を示唆していました。これらの結果は、内部BRBを横切るクロニジンの血液から網膜への輸送には、キャリアを介した輸送方法が含まれ、網膜毛細血管内皮細胞によって発現する新規有機陽イオン輸送体の寄与を示唆していることを示唆しています。

In the present study, the blood-to-retina transport across the inner BRB was investigated for clonidine, a compound which is expected to exhibit a neuroprotective effect for the treatment of severe retinal diseases. In the in vivo study, the integration plot analysis for [(3)H]clonidine exhibited an apparent influx permeability clearance of 457 μL/(min·g retina) in the retina. The in vivo inhibition study suggests that the blood-to-retina transport of clonidine at the BRB is organic cation-sensitive since clonidine, pyrilamine, and propranolol, at a concentration of 40 mM, significantly reduced the retinal uptake index (RUI) of [(3)H]clonidine, and an inhibitory effect on the RUI was also exhibited by verapamil, at a concentration of 3 mM. The in vitro study with TR-iBRB2 cells, an in vitro model cell line of the inner BRB, suggests that carrier-mediated transport is involved in the blood-to-retina transport of clonidine at the inner BRB since the results obtained demonstrated time-, temperature-, pH-, and concentration-dependent [(3)H]clonidine uptake, with a Km of 286 μM. In the in vitro inhibition study, the [(3)H]clonidine uptake was significantly reduced by several organic cations, such as clonidine, verapamil, pyrilamine, and propranolol, and was competitively inhibited by 200 μM verapamil, in spite of slight or no significant alteration being produced with organic anions. Furthermore, the typical substrates and inhibitors of well-known organic cation transporters had no significant effect on the uptake of [(3)H]clonidine to suggest the involvement of novel transporter molecules in the transport of clonidine across the inner BRB. These results suggest that the blood-to-retina transport of clonidine across the inner BRB involves a carrier-mediated transport manner, suggesting the contribution of a novel organic cation transporter expressed by the retinal capillary endothelial cells.