ユーフォルビアにおける金属イオンの効果cf lactea latex植物プロテアーゼの線維化活性へのラテックス

シンクロトロンX線蛍光（SXRF）およびX線吸収分光法（XAS）の2つのシンクロトロンベースの技術は、Ca（2+）とZn（2+）がユーフォルビアCFの天然ラテックスに分布している主要な金属イオンであることを実証しました。ラクタ。両方の金属イオンは、この植物のラテックスから精製されたホモダイマープロテアーゼの線維形成活性に影響を与えることがわかった。二量体タンパク質は、SDS-PAGEによって分析された約82 kDaの推定分子量を有していました。したがって、このタンパク質はEUP-82と呼ばれました。循環二色性（CD）分光法と線維分解活性測定の結果に基づいて、Ca（2+）がバックボーン構造を安定化することにより酵素のタンパク質分解活性を活性化できることがわかった。EUP-82の無傷の立体構造は、51％αヘリックスと9％βシートで構成されるCDスペクトルから予測されました。Zn（2+）（10 mm）は、EUP-82の線維溶解活性を30±1％に低下させる可能性があります。また、CDスペクトルは、酵素活性に対するZn（2+）の阻害効果が、酵素構造の劇的な変化により、ランダムコイルの立体構造を増加させ、αヘリックスとβシート構造を切り替えることによって発生することを支持しました。これらの結果は、血栓症治療の潜在的な薬物として自然源プロテアーゼであるEUP-82を使用するためのさらなるアプリケーションにとって、最初に重要です。EUP-82の線維分解活性は、一般にヒト止血系に関与する血漿Ca（2+）によって強化される場合があります。

Two synchrotron-based techniques, synchrotron X-ray fluorescence (SXRF) and X-ray absorption spectroscopy (XAS), have demonstrated that Ca(2+) and Zn(2+) were the major metal ions distributed in the natural latex of Euphorbia cf. lactea. Both metal ions were found to affect the fibrinogenolytic activity of a homodimeric protease purified from the latex of this plant. The dimeric protein had an estimated molecular mass of about 82 kDa analyzed by SDS-PAGE. Therefore this protein was called as EuP-82. Based on the results of circular dichroism (CD) spectroscopy and the fibrinolytic activity measurement, it was found that Ca(2+) could activate the proteolytic activity of the enzyme by stabilizing its backbone structure. The intact conformation of EuP-82 was predicted from CD spectrum, which consisted of 51 % α-helix and 9 % β-sheet. Zn(2+) (10 mM) could decrease the fibrinolytic activity of EuP-82 to 30 ± 1 %. CD spectrum also supported that the inhibitory effect of Zn(2+) on the enzyme activity occurred by the drastic change of the enzyme structure with increasing the random coil conformation and by switching between α-helix and β-sheet structure. These results could be of first importance for further application to use EuP-82, the natural source protease as a potential drug for the thrombosis treatment. The fibrinolytic activity of EuP-82 may be enhanced by plasma Ca(2+) which generally involves in human hemostasis system.