[マウスにエプスタインバー核抗原1を含む組換えアデノウイルスの構造と免疫学的反応]

この研究は、鼻咽頭癌（NPC）に対してエプスタインバー核抗原1（EBNA1）を発現する組換えアデノウイルスを構築することを目的としています。Epstein-BarrウイルスのEBNA1遺伝子のC末端領域断片は、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）によって標準株B95-8から増幅されました。遺伝子フラグメントは、ECORIおよびBGIII制限酵素部位を使用してPDC316シャトルプラスミドに挿入されました。PDC316-EBNA1シャトルプラスミドおよびPBHGヘルパープラスミドを、配列決定後にHEK293細胞に共発移動しました。可溶性タンパク質はHEK293細胞から抽出され、それが明らかな細胞障害効果を引き起こしました。EBNA1遺伝子の転写と発現は、フローサイトメトリーとウエスタンブロッティングを使用して確認されました。rad-eBNA1力価はTCID50によって測定されました。rad-eBNA1をマウスあたり2 x 10（8）vpの用量でBALB/Cマウスに注入し、EBNA1エピトープ特異的応答は、免疫後1週間、2番目、4週目、8週目に測定されました。EBNA1（939 bp）のターゲットフラグメントはPCRによって得られ、標準株B95-8のシーケンスとコンセンサスにありました。PDC316-EBNA1シャトルプラスミドおよびPBHGヘルパープラスミドをHEK293細胞に皮膚に誘導した後、細胞病性効果が観察されました。rad-eBNA1は、HEK293細胞で正常に再結合されました。EBNA1タンパク質はHEK293細胞で検出され、Rad-EBNA1力価は10（8）TCID50/mLに達しました。EBNA1のCD4+エピトープに対する特定の応答が免疫されたマウスで検出されました。結論として、Rad-EBNA1は免疫されたマウスのEBNA1のCD4+エピトープに対する特定の応答を成功裏に構築および誘導しました。

This study aimed to construct recombinant adenovirus expressing Epstein-Barr nuclear antigen 1 (EBNA1) against nasopharyngeal carcinoma (NPC). The C-terminal region fragment of the ebna1 gene of Epstein-Barr virus was amplified from the standard strain B95-8 by polymerase chain reaction (PCR). The gene fragment was inserted into the pDC316 shuttle plasmid using the EcoRI and BgIII restriction enzyme sites. The pDC316-ebna1 shuttle plasmid and pBHG helper plasmid were cotransfected into HEK293 cells after sequencing. The soluble protein was extracted from HEK293 cells, which caused apparent cytopathic effects. The transcription and expression of the ebna1 gene were confirmed using flow cytometry and Western blotting. rAd-ebna1 titers were measured by the TCID50. rAd-ebna1 was injected into BALB/c mice at a dose of 2 x 10(8) VP per mouse, EBNA1 epitope-specific responses were measured at 1st, 2nd, 4th and 8th weeks post-immunization. The target fragment of ebna1 (939 bp) was obtained by PCR, and was in consensus with the sequence from the standard strain B95-8. Cytopathic effects were observed after the pDC316-ebna1 shuttle plasmid and pBHG helper plasmid were cotransfected into HEK293 cells. rAd-ebna1 was successfully recombined in HEK293 cells. EBNA1 protein was detected in HEK293 cells, rAd-ebna1 titers reached 10(8) TCID50/mL. Specific responses to CD4+ epitopes of EBNA1 were detected in the immunized mice. In conclusion, rAd-ebna1 was successfully constructed and induced specific responses to CD4+ epitopes of EBNA1 in immunized mice.