アニリンブルーを使用したプラスモデスマタでのイメージングカロース：定量的共焦点顕微鏡

Callose（β-1,3-Glucan）は、プラズモード症（PD）の構造的および機能的成分の両方です。PDでのカロースの売上高は、PDを介した分子の細胞間拡散速度を制御します。PD関連のカロースのレベルの変化の正確な評価は、植物の細胞間コミュニケーションの研究における第一選択の実験的アプローチとなっています。アニリンブルーで染色された固定植物組織を使用します。また、ImageJを使用して蛍光画像からPDでカロースレベルの非バイアス定量化のための自動画像分析プロトコルを導入します。同様に、自動化された方法を使用したPDコロース定量の2つの実験例も提供されています。

Callose (β-1,3-glucan) is both structural and functional component of plasmodesmata (Pd). The turnover of callose at Pd controls the cell-to-cell diffusion rate of molecules through Pd. An accurate assessment of changes in levels of Pd-associated callose has become a first-choice experimental approach in the research of intercellular communication in plants.Here we describe a detailed and easy-to-perform procedure for imaging and quantification of Pd-associated callose using fixed plant tissue stained with aniline blue. We also introduce an automated image analysis protocol for non-biased quantification of callose levels at Pd from fluorescence images using ImageJ. Two experimental examples of Pd-callose quantification using the automated method are provided as well.