ESCRT-0タンパク質肝細胞成長因子調節チロシンキナーゼ基質（HRS）は、シグナル伝達アダプター分子（STAM）とは無関係にエンドソームを標的とし、STAMとの複合体形成はそのエンドソームの解離を促進します

肝細胞成長因子調節チロシンキナーゼ基質（HRS）とシグナル伝達アダプター分子（STAM）タンパク質で構成されるESCRT-0複合体は、エンドソームソートの初期段階でユビキチン化された貨物を認識します。過剰発現HRSのエンドソーム蓄積は、以前にエンドソーム拡大に関連することが報告されています。この研究では、HRS過剰発現細胞に共発現する外因性STAM1が、エンドソームに蓄積されたHRSの大部分の拡散局在につながり、障害のある貨物タンパク質分解プロセスの回復をもたらし、したがって、外因性STAMが廃止することを示唆していることがわかりました。HRS陽性エンドソームの異常。膜透過によって細胞に導入された蛍光標識HRSは、STAM1の非存在下でエンドソーム局在を示し、組換えSTAM1の連続的な添加によりエンドソームから徐々に解離しました。さらに、細胞に微小注入されると、蛍光標識HRSもエンドソームの蓄積を示しました。ただし、マイクロインジェクションの前に形成されたESCRT-0複合体はそうではありませんでした。Blue-Nativeページを使用してHeLa細胞の複合体の状態の分析により、膜関連HRSは、STAM1結合形態だけでなく、モノマーとして部分的に存在することが明らかになりました。したがって、我々のデータは、エンドソーム膜上のESCRT-0タンパク質の膜結合と解離サイクルが、貨物選別プロセス中の重要なステップであることを示唆しています。

The ESCRT-0 complex, consisting of the hepatocyte growth factor-regulated tyrosine kinase substrate (Hrs) and the signal-transducing adaptor molecule (STAM) proteins, recognizes ubiquitylated cargo during the initial step of endosomal sorting. The endosomal accumulation of overexpressed Hrs has been reported previously to be associated with endosome enlargement. In this study, we have found that co-expressing exogenous STAM1 in Hrs-overexpressing cells leads to a diffuse localization for a large part of the Hrs accumulated on endosomes and a recovery of the impaired cargo protein degradation process, thus suggesting that exogenous STAM abrogates the abnormalities of the Hrs-positive endosomes. A fluorescently labeled Hrs, introduced into the cells by membrane permeabilization, exhibited endosomal localization in the absence of STAM1 and gradually dissociated from the endosomes upon the sequential addition of recombinant STAM1. Furthermore, when microinjected into cells, the fluorescently labeled Hrs also showed endosomal accumulation; however, ESCRT-0 complexes formed prior to the microinjection did not. Analysis of the state of the complex in HeLa cells using blue-native PAGE revealed that the membrane-associated Hrs exists partly as a monomer and not only in the STAM1-bound form. Thus, our data suggest that the membrane binding and dissociation cycle of the ESCRT-0 proteins on the endosomal membrane is a critical step during the cargo sorting process.