タンパク質1（CDCP1）を含むカブドメインは、結腸癌細胞の接着と運動性を調節します

背景：結腸、肺、胃、乳房、膵臓癌を含むいくつかの癌で、膜貫通糖タンパク質Cdcp1（CUBドメイン含有タンパク質-1）の規制緩和された発現が検出されました。CDCP1は、腫瘍転移を積極的または負に調節することが提案されています。この研究では、転移に直接関連する細胞の特性、つまり接着と運動性におけるCDCP1の役割を評価しました。さらに、CDCP1とテトラスパニンタンパク質CD9との関連が調査されました。 方法：フローサイトメトリーとウエスタンブロッティングにより、CDCP1およびCD9タンパク質の発現を一連の結腸癌細胞株で測定しました。COLO320およびSW480細胞の接着は、マトリゲル接着アッセイを使用して決定されました。RNA干渉によりCDCP1発現が減少したSW480細胞の走化性運動性は、XCelligence Systemリアルタイムセルアナライザーデュアルプレートを8μMポアフィルターと組み合わせて分析しました。これらの画分の密度勾配遠心分離後、密度勾配遠心分離後に洗剤耐性膜画分が生成されました。CDCP1およびCD9タンパク質の潜在的な関連は、共免疫沈降によって評価されました。 結果：COLO320細胞における設計されたCDCP1発現は、マトリゲルへの細胞接着の減少をもたらしました。CDCP1 siRNAによるSW480細胞の治療は、血清誘発性走化性を減少させました。CDCP1およびCD9細胞表面タンパク質およびmRNAレベルは、結腸癌細胞株に正の相関を示し、タンパク質は低レベルでありながら検出可能な複合体を形成しました。SW480細胞溶解物における共免疫沈降のように。 結論：多くの最近の研究では、いくつかの種類のヒト癌細胞の浸潤と転移における細胞表面タンパク質CDCP1に潜在的に重要な役割を割り当てています。この研究では、CDCP1は、結腸癌細胞株の細胞腫瘍の接着と運動性を調節することが示されました。CDCP1とCD9はmRNAおよびタンパク質レベルで共発現し、SW480結腸癌細胞にこれらのタンパク質の分子複合体が存在することの証拠を得ました。

BACKGROUND: Deregulated expression of the transmembrane glycoprotein CDCP1 (CUB domain-containing protein-1) has been detected in several cancers including colon, lung, gastric, breast, and pancreatic carcinomas. CDCP1 has been proposed to either positively or negatively regulate tumour metastasis. In this study we assessed the role of CDCP1 in properties of cells that are directly relevant to metastasis, namely adhesion and motility. In addition, association between CDCP1 and the tetraspanin protein CD9 was investigated. METHODS: CDCP1 and CD9 protein expression was measured in a series of colon cancer cell lines by flow cytometry and Western blotting. Adhesion of Colo320 and SW480 cells was determined using a Matrigel adhesion assay. The chemotactic motility of SW480 cells in which CDCP1 expression had been reduced by RNA interference was analysed using the xCELLigence system Real-Time Cell Analyzer Dual Plates combined with 8 μm pore filters. Detergent-resistant membrane fractions were generated following density gradient centrifugation and the CDCP1 and CD9 protein composition of these fractions was determined by Western blotting. The potential association of the CDCP1 and CD9 proteins was assessed by co-immunoprecipitation. RESULTS: Engineered CDCP1 expression in Colo320 cells resulted in a reduction in cell adhesion to Matrigel. Treatment of SW480 cells with CDCP1 siRNA reduced serum-induced chemotaxis. CDCP1 and CD9 cell-surface protein and mRNA levels showed a positive correlation in colon cancer cell lines and the proteins formed a low-level, but detectable complex as judged by co-sedimentation of detergent lysates of HT-29 cells in sucrose gradients as well as by co-immunoprecipitation in SW480 cell lysates. CONCLUSIONS: A number of recent studies have assigned a potentially important role for the cell-surface protein CDCP1 in invasion and metastasis of a several types of human cancer cells. In this study, CDCP1 was shown to modulate cell-substratum adhesion and motility in colon cancer cell lines, with some variation depending on the colon cancer cell type. CDCP1 and CD9 were co-expressed at the mRNA and protein level and we obtained evidence for the presence of a molecular complex of these proteins in SW480 colon cancer cells.