甲状腺刺激剤受容体刺激自己抗体のバイオアッセイの標準化

背景：機能性甲状腺刺激自己抗体（TSAB）の細胞ベースのバイオアッセイは、敏感な診断ツールです。ただし、国際的な参照資料で標準化されたバイオアッセイは利用できません。TSABバイオアッセイを実施し、TSABレベルを第2の国際標準研究所（IS）08/204と比較して、生物基準と制御のための国立研究所（NIBSC）に対してTSABレベルを調整する研究所間のテスト結果の標準化を促進することを目指しました。 方法：血清TSAB活性は、キメラ甲状腺刺激剤受容体（TSHR）とC-AMP応答依存性のルシフェラーゼを発現するCHO細胞を利用するFDAクレア付きバイオアッセイで測定しました。ISはキャリブレーションに適用されました。TSABの結果は、標本と参照比（SRR％）の割合として報告され、MIU/Lに変換されました。 結果：IS用量反応曲線は、0.3125〜200 mIU/Lの濃度を使用して得られました。IS濃度0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10、20、40、40、60、80、100、120、160、および200 miU/Lの平均TSAB SRR％標準偏差（SD）値は63±4（CV 6.3％）、63±4（63±4（6.3）、67±2（3.0）、76）、76（3.0）、76（3.0）、76）、63±4（63±4（63±4）でした。 ±8（5.9）、201±13（6.5）、294±12（4.1）、336±10（3.0）、348±8（2.3）、360±14（3.8）、371±15（4.0）、381±9（2.4）、389±10（2.6）。グレーブス病患者の12の高TSAB陽性血清を使用して、合計127の希釈実験を実施しました。TSAB陽性血清を希釈する場合、線形範囲5、10、20、40、および80 MIU/L内の濃度をキャリブレーション曲線に使用しました。すべての標準曲線には、R（2）値が0.95> 0.95でした。ISキャリブレーション曲線（4-6％）の変動係数（CV％）値が得られました。ウシTSHと比較して、健康なドナーのプールまたは通常の血清のいずれかを参照コントロールとして使用して有意差は認められませんでした。アッセイカットオフの平均IU測定値（SRR 140％）は9.54±1.68 MIU/Lに対応し、60人のグレーブスの患者に臨床応用が示されました。 結論：TSABバイオアッセイは、線形範囲、定量の制限、および不正確な点で優れた性能を示しました。希釈実験では、高い相関係数と優れた再現性が示されました。したがって、TSABレベルは、SRR％からIU/Lに確実に変換できます。これらの結果は、研究所間でTSABレベルを標準化する視点を提供し、TSAB研究のより正確な比較を可能にします。

BACKGROUND: Cell-based bioassays for functional thyroid stimulating autoantibodies (TSAb) are sensitive diagnostic tools. However, there is no bioassay available that is standardized with international reference material. We aimed to promote the standardization of the test results among laboratories that perform TSAb bioassays and calibrate TSAb levels against the second international standard (IS) 08/204 from the National Institute for Biological Standards and Control (NIBSC). METHODS: Serum TSAb activity was measured with a FDA-cleared bioassay that utilizes CHO cells expressing a chimeric thyrotropin receptor (TSHR) and a c-AMP response-element-dependent luciferase. The IS was applied for calibration. TSAb results were reported as percentage of specimen-to-reference ratio (SRR%) and converted into mIU/L. RESULTS: The IS dose-response curve was obtained using concentrations from 0.3125 to 200 mIU/L. Mean TSAb SRR%±standard deviation (SD) values for the IS concentrations 0.3125, 0.625, 1.25, 2.5, 5, 10, 20, 40, 60, 80, 100, 120, 160, and 200 mIU/L were 63±4 (CV 6.3%), 63±4 (6.3), 67±2 (3.0), 76±6 (7.9), 91±8 (8), 134±8 (5.9), 201±13 (6.5), 294±12 (4.1), 336±10 (3.0), 348±8 (2.3), 360±14 (3.8), 371±15 (4.0), 381±9 (2.4), and 389±10 (2.6), respectively. A total of 127 dilution experiments were performed using 12 high TSAb-positive sera from patients with Graves' disease. When diluting TSAb-positive sera, IS concentrations within the linear range 5, 10, 20, 40, and 80 mIU/L were used for the calibration curve. All standard curves had R(2) values >0.95. Low coefficient of variation (CV %) values for the IS calibration curve (4-6%) were obtained. Compared to bovine TSH, no significant differences were noted using either a pool of healthy donors or a normal serum as reference controls. The average IU measured value for the assay cutoff (SRR 140%) corresponded to 9.54±1.68 mIU/L, and clinical application was shown in 60 Graves' patients. CONCLUSIONS: The TSAb bioassay demonstrated excellent performance in terms of linear range, limit of quantitation, and imprecision. The dilution experiments showed a high correlation coefficient and excellent reproducibility. Thus, TSAb levels can be reliably converted from SRR% to IU/L. These results offer the perspective of standardizing TSAb levels among laboratories and enable more accurate comparison of TSAb studies.