固定化表面の性質は、胎盤アルカリホスファターゼに対する抗体特異性に影響します

固定化タンパク質の天然の立体構造の保持は、特定の組換え抗体（SCFV）の選択と検出など、さまざまな用途に不可欠です。いくつかの腫瘍の表面で発現するonco胎児抗原である胎盤アルカリホスファターゼ（PAP）は、ヒトファージ展示抗体ライブラリからの組換え抗体の選択のために、超磁気粒子に固定されました。単離された抗体は、アルカリホスファターゼのアイソザイム、すなわち骨アルカリホスファターゼ（BAP）または腸アルカリホスファターゼ（IAP）のいずれかと交差反応性であることがわかっており、腫瘍標的に使用できませんでした。これらの条件下で特異性の保持について、特定の抗PAPモノクローナル抗体H17E2をテストしました。抗体の磁気ビーズへの結合IAPおよびBAPとPAPとBAP、および2つのアイソザイムがPAPへの結合を阻害する能力は、抗体のアイソザイム特異性の喪失を示しています。しかし、抗体は、ポリ塩化ビニル（PVC）表面に固定化されたパップに対する特異性を保持しました。両方の表面で酵素活性が観察されました。これは、固定化の性質が微妙な方法で抗原抗体結合に影響を与え、エピトープの立体構造の変化をもたらす可能性があることを示しています。これは、高度な相同性を共有するタンパク質の抗体結合の特異性を決定する結果をもたらす可能性があります。

Retention of native conformation of immobilized protein is essential for various applications including selection and detection of specific recombinant antibodies (scFvs). Placental alkaline phosphatase (PAP), an onco-fetal antigen expressed on the surface of several tumors, was immobilized on supermagnetic particles for selection of recombinant antibodies from a human phage display antibody library. The isolated antibodies were found to be cross-reactive to either of the isozymes of alkaline phosphatase, i.e., bone alkaline phosphatase (BAP) or intestinal alkaline phosphatase (IAP) and could not be used for tumor targeting. A specific anti-PAP monoclonal antibody H17E2 was tested for retention of specificity under these conditions. Binding of the antibody to magnetic beads conjugated IAP and BAP along with PAP and the ability of the two isozymes to inhibit its binding to PAP depicted the loss of isozyme specificity of the antibody. However, the antibody retained its specificity to PAP immobilized on polyvinyl chloride (PVC) surface. Enzyme activity was observed on both surfaces. This demonstrates that nature of immobilization may affect antigen-antibody binding in subtle ways, resulting in alteration of conformation of the epitopes. This may have consequences for determining the specificity of antibody binding for proteins that share a high degree of homology.