鉄硫黄タンパク質は、酵母ミトコンドリアのシトクロムB-C1複合体への低分子量サブユニットの完全なアセンブリに必要です

シトクロムB-C1複合体のリースケ鉄硫黄タンパク質（RIP）の遺伝子を欠く酵母の株を使用して、ミトコンドリア膜のこの複合体のアセンブリを研究しました。この株は、鉄硫黄タンパク質に対する特定の抗体による免疫沈降が続く総RNAのin vitro翻訳で、遺伝子のコーディング領域とin vitro翻訳を含むプローブを使用した北部のハイブリダイゼーションの両方で証明されるように、鉄硫黄タンパク質のmRNAを欠いています。さらに、この株からの分離されたミトコンドリアには、基質としてのユビキノールのデシルアナログを使用したシトクロムCレダクターゼ活性がありませんでした。シトクロムB-C1複合体に対する抗血清による免疫ブロッティング研究により、鉄硫黄タンパク質欠損株からのミトコンドリアには、野生型ミトコンドリアのコアタンパク質I、コアタンパク質II、およびシトクロムC1のレベルがあることが明らかになりました。ただし、シトクロムBの減少は、免疫ブロッティングとスペクトル分析の両方から明らかでした。さらに、放射性標識ミトコンドリアの免疫沈降物から、低分子量サブユニット（17、14、および11 kDa）の量がそれぞれ鉄硫黄を欠くミトコンドリアではそれぞれ53、65、および50％減少していることが明らかです。タンパク質。これらの結果は、鉄硫黄タンパク質が、低分子量サブユニットのシトクロムB-C1複合体への完全なアセンブリに必要であることを示唆しています。

A strain of yeast lacking the gene for the Rieske iron-sulfur protein (RIP) of the cytochrome b-c1 complex was used to study the assembly of this complex in the mitochondrial membrane. This strain lacks the mRNA for the iron-sulfur protein as evidenced by both Northern hybridization using a probe containing the coding region of the gene plus in vitro translation of total RNA followed by immunoprecipitation with a specific antibody against the iron-sulfur protein. In addition, isolated mitochondria from this strain lacked cytochrome c reductase activity with either succinate or the decyl analog of ubiquinol as substrate. Immunoblotting studies with antiserum against the cytochrome b-c1 complex revealed that mitochondria from the iron-sulfur protein-deficient strain have levels of core protein I, core protein II, and cytochrome c1 equal to those of wild-type mitochondria; however, a decrease in cytochrome b was evident from both immunoblotting and spectral analysis. Moreover, it is evident from the immunoprecipitates of radiolabeled mitochondria that the amounts of the low-molecular-weight subunits (17, 14, and 11 kDa) are decreased 53, 65, and 50%, respectively, in mitochondria lacking the iron-sulfur protein. These results suggest that the iron-sulfur protein is required for the complete assembly of the low-molecular-weight subunits into the cytochrome b-c1 complex.