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Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)20150101Vol.1235issue()

天然のヒト骨髄間葉系幹細胞(MSC)を特徴付けるためのマルチパラメーターフローサイトメトリーと細胞並べ替えの使用

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文献タイプ:
  • Journal Article
概要
Abstract

この章では、ヒト骨髄(BM)吸引物からのまれな間葉系幹細胞(MSC)の同定、表現型分析、および細胞並べ替えの方法について説明します。ネイティブBM MSC集団は、CD45( - /低)CD271(+)表現型に基づいて特定されます。この方法は、3つの関連手順で構成されています。手順1には、マイクロビーズベースの前排出ステップが含まれます。他の2つの手順では、単純な塩化物ベースの赤血球溶解(手順3)に続いて、単核細胞(MNC)画分(手順2)以上の単核細胞(MNC)画分(手順2)以上の分離後のMSCの直接フローサイトメトリー分析について説明します。最近説明されたCD45( - /低)CD271(+)細胞での多系統転写産物発現は、ネイティブBM MSC画分が機能的に異なる亜集団にさらに細分化できることを示唆しています。現在のプロトコルは、MSC生物学者がこのエキサイティングな研究分野に入り、in vivoのMSC生物学のより良い理解に向けて前進するのを支援することを望んでいます。

この章では、ヒト骨髄(BM)吸引物からのまれな間葉系幹細胞(MSC)の同定、表現型分析、および細胞並べ替えの方法について説明します。ネイティブBM MSC集団は、CD45( - /低)CD271(+)表現型に基づいて特定されます。この方法は、3つの関連手順で構成されています。手順1には、マイクロビーズベースの前排出ステップが含まれます。他の2つの手順では、単純な塩化物ベースの赤血球溶解(手順3)に続いて、単核細胞(MNC)画分(手順2)以上の単核細胞(MNC)画分(手順2)以上の分離後のMSCの直接フローサイトメトリー分析について説明します。最近説明されたCD45( - /低)CD271(+)細胞での多系統転写産物発現は、ネイティブBM MSC画分が機能的に異なる亜集団にさらに細分化できることを示唆しています。現在のプロトコルは、MSC生物学者がこのエキサイティングな研究分野に入り、in vivoのMSC生物学のより良い理解に向けて前進するのを支援することを望んでいます。

This chapter describes a method for identification, phenotypic analysis, and cell sorting of rare mesenchymal stem cells (MSCs) from human bone marrow (BM) aspirates. The native BM MSC population is identified based on the CD45(-/low)CD271(+) phenotype. The method consists of three related procedures: Procedure 1 involves a microbead-based pre-enrichment step. Two other procedures describe direct flow cytometric analysis of MSCs following the isolation of the mononuclear cell (MNC) fraction (Procedure 2) or more rapidly, following a simple ammonium chloride-based red cell lysis (Procedure 3). Recently described multi-lineage transcript expression in the CD45(-/low)CD271(+) cells suggests that the native BM MSC fraction could be further subdivided into functionally distinct subpopulations. The present protocols are hoped to help MSC biologists to enter this exciting field of research and to take it forward towards a better understanding of MSC biology in vivo.

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