蛍光タンパク質を使用した目に見えるゲルろ過クロマトグラフィーのための実験室の運動

ゲルろ過クロマトグラフィー（GFC）は、サイズに応じて分子を分離し、タンパク質精製のために最も広く使用されている方法の1つです。ここでは、赤蛍光タンパク質（RFP）、緑色蛍光タンパク質（GFP）、黄色の蛍光タンパク質（YFP）、シアン蛍光タンパク質（CFP）、および/またはその融合タンパク質を、実験室演習で直観的に実験的に発現し、精製し、使用しています。GFCを実証します。RFP、RFP-CFP（RC）、YFP-RFP-YFP（YRY）、およびピルビン酸キナーゼII-GFP（PKG）に対応するさまざまなバンドは、0.5 mLのサンプルからSuperDex 200列でよく分離されました。サンプルの体積を増やし、クロマトグラフィー樹脂をSephadex G-100に変更すると、解像度の分離が少なくなりました。学生は、色付きのタンパク質の組み合わせを特定することを楽しんでおり、GFCの解像度に影響を与える要因を理解するのに役立つこの演習を見つけました。

Gel filtration chromatography (GFC) separates molecules according to size and is one of the most widely used methods for protein purification. Here, red fluorescent protein (RFP), green fluorescent protein (GFP), yellow fluorescent protein (YFP), cyan fluorescent protein (CFP), and/or their fusion proteins were prokaryotically expressed, purified, and used in a laboratory exercise to intuitively demonstrate GFC. Different bands, corresponding to RFP, RFP-CFP (RC), YFP-RFP-YFP (YRY), and pyruvate kinase II-GFP (PKG) were well separated on a Superdex 200 column from a 0.5-mL sample. Increasing the sample volume and changing the chromatographic resin to Sephadex G-100 resulted in lower resolution separation. Students enjoyed identifying combinations of colored proteins and found this exercise helpful for understanding the factors that affect GFC resolution.