マウスのエリスロイドコロニー形成ユニットのエリスロポエチン受容体：自然史

エリスロポエチン（EPO）の反応と結合は、精製マウスCFU-Eとその子孫で評価されました。いくつかの機能が登場しました。まず、CFU-EのEPOは急速に流動的です。125I-EPOの内在化のハーフタイムは約4〜5分です。第二に、コンピューター支援のスキャッチャード分析は、貧血動物のCFU-Eの70を超える高親和性エポ受容体部位がin vivoで獲得されたEPOによってすでに占有されていることを示しています。これが削除されると、CFU-Eあたり370個以上のサイトの40％が高親和性クラス（解離定数、kd：73 pmol/l +/- 15 [se]）に属し、60％がaに属します低親和性クラス（KD：813 PMOL/L +/- 246）。第三に、EPOの非存在下でCFU-Eから発生する少数の小さなコロニーは、59fe-heme生合成の連続アッセイによって示されています。培養、ほとんどの紅斑は、成長にかなりのEPOを必要としなくなりました。したがって、CFU-EによるEPOの初期のニーズはほぼ絶対的ですが、この必要性は、既に搭載されている多くの場合、多くの場合実質的なEPOによって満たされていません。推論は、EPO受容体を急速に回転させる繰り返しの占有が必要であることです。第4に、CFU-Eの子孫によって拘束および/または内在化されたのは、EPO添加培養で14時間後にゼロタイムレベルの40％に減少し、28時間後に消失します。Scatchardの分析は、73 PMOL/L KD受容体部位が7〜8時間で検出不能になることを示していますが、813 PMOL/L KD部位は照らされず、16時間x 3分の1が少ないことが示されています。高親和性部位のこの明らかな消失と低親和性部位の持続性は、（a）少なくとも2つの遺伝子産物がEPO結合を媒介することを示唆しています。（b）高親和性サイトは、培養の最初の8時間の間にEPOの成長機能を媒介します。（c）長引く低親和性受容体は、認識されていないEPO機能を媒介する可能性があります。第五に、106および91-kdのCFU-E膜ポリペプチドを125-EPOに架橋できる効率は、低EPO濃度よりも高EPO濃度で標識された細胞の場合は2〜3倍高いです。低親和性サイトの反応を反映します。

Erythropoietin (Epo) response and binding was assessed in purified murine CFU-E and their descendants. Several features emerged. First, Epo on CFU-E is in rapid flux: Half-time for 125I-Epo internalization is approximately four to five minutes. Second, computer-aided Scatchard analyses indicate that greater than 70 high-affinity Epo-receptor sites on anemic animal CFU-E are sometimes already occupied by Epo acquired in vivo. When this is removed, 40% of greater than or equal to 370 sites per CFU-E belong to a high-affinity class (dissociation constant, kd: 73 pmol/L +/- 15 [SE]) and 60% belong to a low-affinity class (kd: 813 pmol/L +/- 246). Third, the few small colonies that develop from CFU-E in the absence of Epo are shown, by serial assay of 59Fe-heme biosynthesis, to stem from contaminating erythroblasts: a result consistent with our finding that, after eight-hour CFU-E culture, most erythroblasts no longer require appreciable Epo for growth. Thus, although the early need for Epo by CFU-E is nearly absolute, this need is not met by the often substantial Epo already on board. The inference is that repeated occupancy of the rapidly turning over Epo receptors is required. Fourth, Epo bound and/or internalized by CFU-E descendants decreases to 40% of zero-time levels after 14 hours in Epo-supplemented culture and disappears after 28 hours. Scatchard analyses indicate that 73 pmol/L kd receptor sites become undetectable at seven to eight hours, whereas 813 pmol/L kd sites are undiminished and only one-third less by 16 hours. This apparent disappearance of high-affinity sites and persistence of low-affinity sites suggests that (a) at least two gene products mediate Epo binding, eg, two different receptor polypeptides or one receptor and one cofactor which modulates affinity; (b) high-affinity sites mediate the growth function of Epo during the first eight hours of culture; and (c) lingering low-affinity receptors may mediate some unrecognized Epo function. Fifth, the efficiency with which 106- and 91-Kd CFU-E membrane polypeptides can be cross-linked to 125I-Epo is two- to threefold higher for cells labeled at high Epo concentrations than at low ones, which suggests that these polypeptides largely reflect low-affinity site reactions.