機能獲得因子IXバリアントR338Lを採用して血友病の有効性と安全性を高めるヒト遺伝子治療：進行中のアデノ関連ウイルス臨床試験をサポートする前臨床評価

トランス駆動肝臓のベクターカプシド用量依存性炎症により、アデノ関連ウイルス（AAV）因子IX（FIX）遺伝子治療ベクターの能力が制限され、ヒト臨床試験で重度の血液菌Bに確実に変換されます。これらの試験では、臨床的成功への影響に関して、AAV中和抗体と空のAAVキャプシドを理解する必要性も特定しました。これらの安全性の懸念に対処するために、スケーラブルな製造プロセスを使用して、最小（<10％）の空のカプシドでFIXR338Lの獲得バリアントを発現するGMPグレードのAAV8を生成し、包括的な用量応答、生物分布、および安全評価を実施しました。臨床的に関連する血友病モデルで。SCAAV8.FIXR338Lベクターは、野生型固定と比較して6倍を超える固定特異的活性を増加させ、テール切断出血課題における用量依存性止血に関連する2〜500％の固定活動を生成した線量応答からの線形線量応答を実証しました。さらに重要なことに、血友病性関節症の臨床的罹患率を密接に模倣する出血モデルを使用すると、SCAAV8.FIXR338Lベクターを投与されたマウスは、同一の用量の野生型ベクターを投与されたマウスと比較した場合、血縁症後に最小限の組織病理学的所見を発症しました。止血マウス（n = 20）および血友病マウス（n = 88）は、末梢静脈内ベクター送達後に固定抗体を発症しませんでした。CD8（+）T細胞肝臓の浸潤は、包括的な生体内分布評価（n = 60動物）における肝臓のscaav8.fixr338lの顕著なトロピズムにもかかわらず、観察されませんでした。空のカプシドの役割に関して、in vivo fixR338L発現は、AAV8に栄養化する抗体のさまざまな力価の存在下または非存在下で、空のAAV粒子の存在によって影響を受けることはないことを実証しました。ベクターの送達から8〜10か月後に修正（ - / - ）マウスの壊死により、FIXR338Lを発現するマウスの微小血管または大血管血栓症は明らかにされていません（血漿修正活性、100-500％）。これらの前臨床研究は、SCAAV8.FIXR338Lベクターの進行中の第1/2人のヒト臨床試験をサポートする有効性プロファイル（BAX335に指定）を示しています。

Vector capsid dose-dependent inflammation of transduced liver has limited the ability of adeno-associated virus (AAV) factor IX (FIX) gene therapy vectors to reliably convert severe to mild hemophilia B in human clinical trials. These trials also identified the need to understand AAV neutralizing antibodies and empty AAV capsids regarding their impact on clinical success. To address these safety concerns, we have used a scalable manufacturing process to produce GMP-grade AAV8 expressing the FIXR338L gain-of-function variant with minimal (<10%) empty capsid and have performed comprehensive dose-response, biodistribution, and safety evaluations in clinically relevant hemophilia models. The scAAV8.FIXR338L vector produced greater than 6-fold increased FIX specific activity compared with wild-type FIX and demonstrated linear dose responses from doses that produced 2-500% FIX activity, associated with dose-dependent hemostasis in a tail transection bleeding challenge. More importantly, using a bleeding model that closely mimics the clinical morbidity of hemophilic arthropathy, mice that received the scAAV8.FIXR338L vector developed minimal histopathological findings of synovitis after hemarthrosis, when compared with mice that received identical doses of wild-type FIX vector. Hemostatically normal mice (n=20) and hemophilic mice (n=88) developed no FIX antibodies after peripheral intravenous vector delivery. No CD8(+) T cell liver infiltrates were observed, despite the marked tropism of scAAV8.FIXR338L for the liver in a comprehensive biodistribution evaluation (n=60 animals). With respect to the role of empty capsids, we demonstrated that in vivo FIXR338L expression was not influenced by the presence of empty AAV particles, either in the presence or absence of various titers of AAV8-neutralizing antibodies. Necropsy of FIX(-/-) mice 8-10 months after vector delivery revealed no microvascular or macrovascular thrombosis in mice expressing FIXR338L (plasma FIX activity, 100-500%). These preclinical studies demonstrate a safety:efficacy profile supporting an ongoing phase 1/2 human clinical trial of the scAAV8.FIXR338L vector (designated BAX335).