交差反応性ノロウイルス特異的モノクローナル抗体の特性評価

ノロウイルス（NOVS）は一般に、急性胃腸炎の発生を引き起こします。NOV感染症の迅速な検出には、広く反応性の診断アッセイが不可欠です。私たちは以前、広く反応性のあるモノクローナル抗体（MAB）のパネルを生成しました。16の異なる11月の遺伝子型（6つのGenogroup I [GI]から6、GIIから9、GIVから1）からのウイルス様粒子（VLP）を使用することにより、MAB反応性を特徴づけました。MABは、遺伝子型特異的またはジェネグループ内およびジェネグループ間で複数の遺伝子型を認識していました。次に、MAB解離定数（KD）を結合親和性の代理として測定するために、表面プラズモン共鳴（SPR）分析を適用しました。10 nm未満のkdレベルは、強い結合を示すと見なされました。一部のmabは、SPR分析によってVLPと相互作用しませんでした。このMAB-VLP相互作用の欠如をさらに評価するために、MABは、キャプチャELISAでNOV VLPを識別する能力について評価されました。KDをSPR分析で測定できなかったこれらのmAbは、NOV VLPをキャプチャできませんでした。対照的に、測定可能なKDを持つ人は、キャプチャELISAに正の信号を与えました。したがって、VP1突出ドメインのいくつかの広く反応性エピトープは、無傷の粒子に部分的にマスクされる可能性があります。1つのmAB、NV23は、サンドイッチELISAによってテストされた16の遺伝子型からジェネグループI、II、およびIV VLPを検出することができ、閾値サイクル（CT）値が<31であったときに、リアルタイムの逆転写PCRで陽性の陽性サンプルで陽性であることを成功裏に検出しました。SPR分析を含むMAB反応性の生化学的分析により、NV23はノロウイルス診断アッセイに適用するための広範な反応性リガンドとして特定されました。

Noroviruses (NoVs) commonly cause acute gastroenteritis outbreaks. Broadly reactive diagnostic assays are essential for rapid detection of NoV infections. We previously generated a panel of broadly reactive monoclonal antibodies (MAbs). We characterized MAb reactivities by use of virus-like particles (VLPs) from 16 different NoV genotypes (6 from genogroup I [GI], 9 from GII, and 1 from GIV) coating a microtiter plate (direct enzyme-linked immunosorbent assay [ELISA]) and by Western blotting. MAbs were genotype specific or recognized multiple genotypes within a genogroup and between genogroups. We next applied surface plasmon resonance (SPR) analysis to measure MAb dissociation constants (Kd) as a surrogate for binding affinity; a Kd level of <10 nM was regarded as indicating strong binding. Some MAbs did not interact with the VLPs by SPR analysis. To further assess this lack of MAb-VLP interaction, the MAbs were evaluated for the ability to identify NoV VLPs in a capture ELISA. Those MAbs for which a Kd could not be measured by SPR analysis also failed to capture the NoV VLPs; in contrast, those with a measurable Kd gave a positive signal in the capture ELISA. Thus, some broadly cross-reactive epitopes in the VP1 protruding domain may be partially masked on intact particles. One MAb, NV23, was able to detect genogroup I, II, and IV VLPs from 16 genotypes tested by sandwich ELISA, and it successfully detected NoVs in stool samples positive by real-time reverse transcription-PCR when the threshold cycle (CT) value was <31. Biochemical analyses of MAb reactivity, including SPR analysis, identified NV23 as a broadly reactive ligand for application in norovirus diagnostic assays.