プラズマ全体のTOFMSによって検出された新しいサイレントアルブミンバリアント（191ALA→THR）

背景：血清タンパク質の電気泳動は、ビスまたは同種性炭素血症と呼ばれる複数のアルブミン帯域を時折明らかにし、その状態を継承することもできますが、それを獲得することもできます。 方法：アルブミン構造の定性的変化の調査に対する新しい高解像度アプローチを提示します。ここで詳しく説明されているオンライン逆位相時代の質量分析手順（TOF MS）には、0.2μL未満の血漿が必要であり、実行には約10分かかります。古典的な二胞性尿症を伴う2つの血漿サンプルを使用して、遺伝的変異を検出する手順の有効性を検証しました。新規突然変異が検出されたとき、ネイティブの非還元アルブミンの質量マッピングを使用して、その位置を特定し、アルブミン遺伝子の標的DNAシーケンスを通知しました。 結果：正常な血清アルブミンは、66,439 DAで予想される主要なアイソフォームを示し、電気泳動変異体はそれぞれ-14および+744 DAで追加成分の共等量発現を示しました。驚くべきことに、想定されるコントロールの1つは、66,439および66,469 Daでペアのアルブミンピークを示し、この30 DAの増加はARG（114）とARG（197）の間に局在し、DNAシーケンスを介して新しい191ALA→THR（+30 DA）置換が原因であることが確認されました。 結論：ここで開発されたエレクトロスプレーTOF MSアプローチは、アルブミン一次構造の微小な変化を明らかにする迅速で敏感で非常に正確な方法を提供します。

BACKGROUND: Serum protein electrophoresis occasionally reveals multiple albumin bands referred to as bis- or alloalbuminaemia, and whilst the condition can be inherited it may also be acquired. METHODS: We present a new high resolution approach to the investigation of qualitative changes in albumin structure. The on-line reverse phase time-of-flight mass spectrometry procedure (TOF MS) elaborated here requires <0.2 μl of plasma and takes ~10 min to perform. Two plasma samples with classical bisalbuminaemia were used to verify the efficacy of the procedure for detecting genetic variants. When a novel mutation was detected, mass mapping of native unreduced albumin was used to pinpoint its location and inform targeted DNA sequencing of the albumin gene. RESULTS: Normal serum albumin showed its expected major isoform at 66,439 Da and the electrophoretic variants showed co-equal expression of additional components at -14 and +744 Da respectively. Surprisingly, one of the supposed controls showed paired albumin peaks at 66,439 and 66,469 Da and this 30 Da increase in mass was localised to between Arg(114) and Arg(197) and confirmed as being due to a novel 191Ala→Thr (+30 Da) substitution through DNA sequencing. CONCLUSIONS: The electrospray TOF MS approach developed here provides a rapid, sensitive and extremely precise method of revealing minute changes in albumin primary structure.