ATPの過剰発現による酵母Yarrowia lipolyticaの脂質蓄積の強化：Mus筋筋からのクエン酸リアーゼ

Yarrowia Lipolyticaは大量の貯蔵脂質を蓄積する可能性があり、バイオ燃料用の多価不飽和脂肪酸およびその他の脂質の生産にかなりの可能性があります。窒素源が培地で使い果たされると、脂質蓄積のためにATP：citrateリアーゼ（ACL）によって、主要な中間体であるクエン酸塩がアセチルCoAに変換されます。しかし、この酵母では、クエン酸塩のほとんども培地に分泌されます。脂質生合成の内因性基質（アセチルCoA）レベルを増加させるために、MUS筋筋のACL遺伝子は、Y. lipolyticaでモノコピー統合ベクターPina1312SPおよび多コピー統合ベクターPina1292spを伴うY. lipolyticaで過剰発現しました。これにより、脂質含有量は7.3％から11％から23％（w/w）の細胞乾燥重量を増加させました。細胞の成長はわずかに影響を受けました。マルチコピー統合形質転換体は、単コピー統合形質転換体よりも脂質含有量が高い。形質転換体の脂質含有量は、統合されたACL遺伝子のコピー数と一致していました。ACLの過剰発現は、酵母の脂肪酸プロファイルに有意な影響を与えませんでした。これらの結果は、ACLが重要なアセチルCoA生産者であり、脂質酵母Y. lipolyticaの脂質蓄積に重要な役割を果たすことを示唆しています。

Yarrowia lipolytica can accumulate large amounts of storage lipids and has considerable potential for the production of polyunsaturated fatty acids and other lipids for biofuels. When the nitrogen source is exhausted in the medium, the key intermediate, citrate, is converted to acetyl-CoA by ATP:citrate lyase (ACL) for lipid accumulation. However, in this yeast most of the citrate is also secreted into the culture medium. To increase the endogenous substrate (acetyl-CoA) level for lipid biosynthesis, the acl gene from Mus musculus was over-expressed in Y. lipolytica with mono-copy integration vector pINA1312sp and multi-copy integration vector pINA1292sp. This increased the lipid content from 7.3% to between 11% and 23% (w/w) of the cell dry weight. Cell growth was only slightly affected. Multi-copy integration transformants had higher lipid contents than mono-copy integration transformants; the lipid content of the transformants was consistent with the copy number of acl gene integrated. Over-expression of ACL had no significant effect on fatty acid profile of the yeast. These results suggested that ACL is an important acetyl-CoA producer and plays a vital role in lipid accumulation in oleaginous yeast Y. lipolytica.