日和見的真菌とヒトマクロファージおよび樹状細胞との相互作用

はじめに：Purpureocillium lilacinumは、抗真菌薬に耐容性のあるヒロヒロ菌症の因果剤として出現しています。しかし、P。lilacinum感染の根底にある病原性メカニズムは理解されていません。この研究では、in vitroでのP. lilacinum分生子とヒトマクロファージおよび樹状細胞との相互作用を調査しました。 方法：P. lilacinumの臨床分離株の胞子は、冷却ショックによって得られました。単核細胞は、8人の健康な人から分離されました。単球は、寒冷凝集により分離され、37°C​​で7〜10日間インキュベートするか、サイトカインヒト顆粒球マクロファージコロニー刺激因子とインターロイキン-4の添加により樹状細胞にインキュベートすることにより分化しました。1時間、6時間、および24時間の1：1、2：1、および5：1（分生子：細胞）の比率で1：1、2：1、および5：1の比率で分生懸濁液をヒト細胞に加え、感染をGiemsa染色と光学顕微鏡で評価しました。 結果：1時間の相互作用の後、P。lilacinumの分生子はヒト細胞によって内在化され、6時間の接触後、一部の分生子が膨張しました。24時間の相互作用後、分生子は生殖管と菌糸を生成し、マクロファージと樹状細胞膜の破壊につながりました。感染率は、2：1および1：1の比で細胞とP. lilacinum分生子を6時間インキュベートした後に分析した後、それぞれ76.5％および25.5％で、培養された樹状細胞ではそれぞれ76.5％および25.5％と54.3％と19.5％でした。 結論：P. lilacinum conidiaは、マクロファージと樹状細胞の両方に感染して破壊することができ、この病原性菌がヒトの食作用細胞に侵入する能力を明確に示しています。

INTRODUCTION: Purpureocillium lilacinum is emerging as a causal agent of hyalohyphomycosis that is refractory to antifungal drugs; however, the pathogenic mechanisms underlying P. lilacinum infection are not understood. In this study, we investigated the interaction of P. lilacinum conidia with human macrophages and dendritic cells in vitro. METHODS: Spores of a P. lilacinum clinical isolate were obtained by chill-heat shock. Mononuclear cells were isolated from eight healthy individuals. Monocytes were separated by cold aggregation and differentiated into macrophages by incubation for 7 to 10 days at 37°C or into dendritic cells by the addition of the cytokines human granulocyte-macrophage colony stimulating factor and interleukin-4. Conidial suspension was added to the human cells at 1:1, 2:1, and 5:1 (conidia:cells) ratios for 1h, 6h, and 24h, and the infection was evaluated by Giemsa staining and light microscopy. RESULTS: After 1h interaction, P. lilacinum conidia were internalized by human cells and after 6h contact, some conidia became inflated. After 24h interaction, the conidia produced germ tubes and hyphae, leading to the disruption of macrophage and dendritic cell membranes. The infection rate analyzed after 6h incubation of P. lilacinum conidia with cells at 2:1 and 1:1 ratios was 76.5% and 25.5%, respectively, for macrophages and 54.3% and 19.5%, respectively, for cultured dendritic cells. CONCLUSIONS: P. lilacinum conidia are capable of infecting and destroying both macrophages and dendritic cells, clearly demonstrating the ability of this pathogenic fungus to invade human phagocytic cells.