Gタンパク質シグナル伝達3の活性化因子は、Gαのヌクレオチド交換を促進せずにコリンエステラーゼ-8aの阻害剤に対する耐性を持つ複合体を形成します（I3）

Gタンパク質シグナル伝達3（AGS3）の活性化因子は、Gα（I/O）サブユニットをAGS3/Gα（I/O）-GDP複合体として安定化するグアニンヌクレオチド解離阻害剤（GDI）です。再構成実験では、AGS3/Gα（I/O）-GDP複合体は、ヘテロトリメラGαプロテインのグアニン交換因子（GEF）であるコリンエステラーゼ8A（RIC-8A）の阻害剤に対する耐性の基質として機能する可能性があることが最近実証されました。。RIC-8Aが細胞環境でAGS3に結合しているGα（I/O）サブユニットを活性化する能力は確認されていないため、AGS3の異なる形態を発現するHEK293細胞のcAMP蓄積に対するRIC-8Aの効果を調べました3およびGα（I3）。共免疫沈降アッセイは、全長Ags3とそのNおよびC末端切り捨てされた変異体がHEK293細胞のRIC-8Aと相互作用できることを示しています。酵母2ハイブリッドアッセイにより、RIC-8Aは心臓で内因的に発現するAgs3の短いAgs3に直接結合できることがさらに確認されました。しかし、RIC-8Aは、AdenylylシクラーゼのGα（I）誘導抑制を促進することができず、細胞環境でAGS3/Gα（I/O）-GDP複合体のGEFとして機能しない可能性があることを示唆しています。

Activator of G protein signaling 3 (AGS3) is a guanine nucleotide dissociation inhibitor (GDI) which stabilizes the Gα(i/o) subunits as an AGS3/Gα(i/o)-GDP complex. It has recently been demonstrated in reconstitution experiments that the AGS3/Gα(i/o)-GDP complex may act as a substrate of resistance to inhibitors of cholinesterase 8A (Ric-8A), a guanine exchange factor (GEF) for heterotrimeric Gα proteins. Since the ability of Ric-8A to activate Gα(i/o) subunits that are bound to AGS3 in a cellular environment has not been confirmed, we thus examined the effect of Ric-8A on cAMP accumulation in HEK293 cells expressing different forms of AGS3 and Gα(i3). Co-immunoprecipitation assays indicate that full-length AGS3 and its N- and C-terminal truncated mutants can interact with Ric-8A in HEK293 cells. Yeast two-hybrid assay further confirmed that Ric-8A can directly bind to AGS3S, a short form of AGS3 which is endogenously expressed in heart. However, Ric-8A failed to facilitate Gα(i)-induced suppression of adenylyl cyclase, suggesting that it may not serve as a GEF for AGS3/Gα(i/o)-GDP complex in a cellular environment.