[ヒト羊膜上皮細胞のin vitro培養と分子特性

目的：in vitroで培養されたヒト羊膜上皮細胞（HAEC）の生物学的および分子特性を調査する。 方法：HAECは、帝王切開後のアムニオンからの酵素消化により分離されました。細胞の成長は逆顕微鏡下で観察され、細胞成長の曲線はCCK-8アッセイによって測定されました。HAECのコロニー形成効率は、Giemsa染色によって観察されました。フローサイトメトリーを使用して、細胞周期分布を検出し、CD29、CD31、CD44、CD59、CD105、CD117、CD133、HLA-DRの発現を分析しました。CD9、E-カドヘリン、ポドカリキシン様タンパク質（PODXL）、病期特異的胚抗原-4（SSEA-4）、性決定領域Y-box 2タンパク質（SOX2）、SSEA-1、NANOG、オクタメラー - の発現結合タンパク質3/4（Oct-3/4）は、免疫蛍光染色によって同定されました。 結果：純粋なHAECは、酵素分離法によって取得できます。細胞は順守と多角形の形状で成長しました。彼らは、遵守の3日目から指数関数的な成長段階に入りました。細胞周期分布の分析により、細胞の66％がG0/G1相、S期で31.69％、G2/M相で2.31％であることが明らかになりました。さらに、HAECのコロニー形成率は（9.33±2.00）％でした。フローサイトメトリーと免疫蛍光染色により、CD44、CD29、CD105、CD59、CD9、E-カドヘリン、PODXL、SSEA-4、SOX2、SSEA-1、NANOGの発現が陽性であることが示されました。ただし、CD31、CD117、CD133、HLA-DRの発現は陰性でした。 結論：HAECは培養し、しばらくの間in vitroで増殖能力を持つことができます。HAECは、いくつかの胚性幹細胞関連表面分子を発現します。

OBJECTIVE: To investigate the biological and molecular characteristics of human amniotic epithelial cells (HAECs) cultured in vitro. METHODS: HAECs were isolated by enzyme digestion from amnion after cesarean section. The growth of the cells was observed under an inverted microscope and the curve of cell growth was measured by CCK-8 assay. The colony formation efficiency of HAECs was observed by Giemsa staining. Flow cytometry was used to detect cell cycle distribution and analyze the expressions of CD29, CD31, CD44, CD59, CD105, CD117, CD133, HLA-DR in the second passage of HAECs. The expressions of CD9, E-cadherin, podocalyxin-like protein (PODXL), stage-specific embryonic antigen-4 (SSEA-4), sex determining region Y-box 2 protein (SOX2), SSEA-1, Nanog, octamer-binding protein 3/4 (Oct-3/4) were identified by immunofluorescence staining. RESULTS: Pure HAECs could be obtained by enzymatic isolation method. The cells grew with adherence and polygonal shape. They entered exponential growth stage from the third day of adherence. The analysis of cell cycle distribution revealed that 66% of the cells were in G0/G1 phase, 31.69% in S phase and 2.31% in G2/M phase. In addition, the colony forming rate of HAECs was (9.33±2.00) %. Flow cytometry and immunofluorescence staining showed that the expressions of CD44, CD29, CD105, CD59, CD9, E-cadherin, PODXL, SSEA-4, SOX2, SSEA-1, Nanog, Oct-3/4 were positive. However, the expressions of CD31, CD117, CD133, HLA-DR were negative. CONCLUSION: HAECs can be cultured and have proliferation ability for some time in vitro; HAECs express some embryonic stem cell-associated surface molecules.