C反応性タンパク質のためのビーズベースのアプタマー/抗体検出システムの開発

多重化ビードベースのプラットフォームは、バイオモニタリングおよびバイオセンシングアプリケーションの特定の分析物を標的とするアッセイの開発のためのアプローチを提供します。多分析プロファイリング（XMAP）アッセイは、通常、関心のある分析物の捕獲と検出のために抗体を使用してサンドイッチ型形式を使用し、システムは複数のターゲットの同時定量を可能にします。この研究では、C反応性タンパク質（CRP）の検出のためのアプタマー/抗体アッセイが開発されました。CRPは、基底レベルの上昇が多くの病理のリスクの増加と相関する炎症の急性期マーカーです。このアッセイでは、CRPを結合するRNAアプタマーをビーズに共役して、捕獲剤として作用しました。蛍光標識ストレプトアビジンに結合したビオチン化抗CRP抗体をCRPの定量化に使用しました。CRPアッセイの検出限界は、希釈血清で0.4 mg/Lでした。次に、アッセイを使用して、認定された参照資料（129％回復）を含む許容回収率（70-130％の外挿）を持つ希釈血清で0.4〜10mg/Lの範囲のSPIKED CRPサンプルを検出しました。CRPアプタマーのこのプラットフォームへの組み込みの成功により、他のアプタマーターゲットシステムの調査がXMAPタイプのアッセイを使用して測定可能な分析物の数を増やすことができることを示しています。

A multiplexing bead-based platform provides an approach for the development of assays targeting specific analytes for biomonitoring and biosensing applications. Multi-Analyte Profiling (xMAP) assays typically employ a sandwich-type format using antibodies for the capture and detection of analytes of interest, and the system permits the simultaneous quantitation of multiple targets. In this study, an aptamer/antibody assay for the detection of C-reactive protein (CRP) was developed. CRP is an acute phase marker of inflammation whose elevated basal levels are correlated with an increased risk for a number of pathologies. For this assay, an RNA aptamer that binds CRP was conjugated to beads to act as the capture agent. Biotinylated anti-CRP antibody coupled to fluorescently labeled streptavidin was used for quantification of CRP. The detection limit of the CRP assay was 0.4 mg/L in diluted serum. The assay was then used to detect spiked CRP samples in the range of 0.4 to 10mg/L in diluted serum with acceptable recoveries (extrapolated values of 70-130%), including that of a certified reference material (129% recovery). The successful incorporation of the CRP aptamer into this platform demonstrates that the exploration of other aptamer-target systems could increase the number of analytes measurable using xMAP-type assays.